當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TCVNPF人神經(jīng)保護因子ELISA試劑盒實驗原理
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結果,可提供免費技術咨詢服務!
產(chǎn)品名稱 | CVNPF人神經(jīng)保護因子ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human Cobra venom neuronal protective factor, CVNPF Elisa Kit |
貨號 | FS-H63234 |
公司“質量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等?
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Lactobacillus murinus 鼠乳桿菌Lactobacillus murinus分離基物:鼠腸道凍干物安全等級:1模式菌株:no潛在益生菌CM0006生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:≥99%
Escherichia coli EPEC 026:K60 致病性大腸埃希氏菌Escherichia coli EPEC 026:K60分離基物:烤串凍干物安全等級:2模式菌株:no研究、質量控制。NB生長條件:37℃,好氧,24h存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Pseudomonas spices 假單胞桿菌Pseudomonas spices凍干安全等級:1模式菌株:no營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件:28℃,好氧,24-48h 純度:≥70%,用于熒光分析
Fusarium nivale 雪腐鐮刀菌(斜面)Fusarium nivale分離基物:雪腐病麥斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。生長條件:25~28℃,好氧 純度:97%
Streptomyceslincolnensis 林肯鏈霉菌Streptomyceslincolnensis分離基物:土壤安全等級:1模式菌株:no產(chǎn)林可霉素158生長條件:26℃ 純度:97%
morganella morganii 摩氏摩根菌morganella morganii凍干安全等級:1模式菌株:no營養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。生長條件:30℃,好氧,24h 純度:96%
Escherichia coli EIEC 腸道侵襲性大腸埃希氏菌Escherichia coli EIEC凍干安全等級:2模式菌株:no研究,《GB/T 4789.6-2003致瀉大腸埃希氏菌檢驗》陽性對照菌株。營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。121℃,15min。生長條件:37℃,好氧。生長特性革蘭氏陰性桿菌。含侵襲性質粒調節(jié)基因(invE)存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:96%
Alcaligenes│eutrophus 真氧產(chǎn)菌Alcaligenes│eutrophus凍干物安全等級:1模式菌株:no用于合成可降解塑料—聚羥基丁(PHB)的研究。CM0002生長條件:30℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:96%
CVNPF人神經(jīng)保護因子ELISA試劑盒實驗原理SS瓊脂鼠膠質氣管上皮MMP9 基質金屬蛋白酶9
SS瓊脂鼠巨噬氣道平滑肌CD105/Endoglin CD105蛋白
亞利桑那瓊脂(SA)鼠淋巴成纖維肺成纖維Mycobacterium bovis 牛結核桿菌菌體蛋白
化鎂孔雀綠肉湯(MM/RV/R10)鼠腎管上皮支氣管上皮AMH/MIS Muellerian抑制因子抗原
HE瓊脂(HE)鼠心肌支氣管成纖維AEG-1 peptide AEG-1抗原
HE瓊脂(HE)鼠間充質干-骨髓心肌CD31 (PECAM-1) 血板內皮黏附分子-1(抗原)
賴氨脫羧酶培養(yǎng)基鼠胚胎成纖維心肌成纖維ADFP/ADRP/adipophilin 脂肪組織分化相關蛋白抗原
尿素瓊脂基礎鼠胚胎成纖維-素處理主動脈內皮Immunoglobuin binding protein-1(CD79A)IGBP-1 免疫球蛋白結合蛋白-1
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準
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