細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：前列腺成纖維細胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號：FS-01X9825

產(chǎn)品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

大鼠褪黑(MT/MLT)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Melatonin,MT/MLT ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠成纖維細胞生長因子10(FGF-10)ELISA試劑盒英文名稱：Rat fibroblast growth factor-10,FGF-10 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠分泌型磷脂A2(sPLA2)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat secreted phospholipase A2,sPLA2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠胞漿型磷脂A2(cPLA2)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Cytosolic Phospholipase A2,cPLA2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端(ⅠCTP)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Cross-linked Carboxy-terminal telopeptide of type Ⅰ collagen,ⅠCTP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠肌鈣蛋白T(Tn-T)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Troponin T,Tn-T ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠CD8分子(CD8)ELISA試劑盒英文名稱：Rat cluster of differentiation 8,CD8 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒英文名稱：Rat epidermal growth factor receptor,EGFR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠白介2可溶性受體(IL-2sR)ELISA試劑盒英文名稱：Rat soluble Interleukin 2 recepter,IL-2sR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠軸突生長誘向因子1(Ntn1)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Netrin-1,Ntn1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠乳脫氫(LDH)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Lactate Dehydrogenase,LDH ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠抗髓鞘相關糖蛋白抗體(MAG Ab)ELISA試劑盒英文名稱：Rat anti-myelin associated glycoprotein antibody,MAG Ab ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠Ⅰ型膠原C端(CTX-Ⅰ)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat C-telopeptide of type Ⅰ collagen,CTX-Ⅰ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠磷化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒英文名稱：Rat phospho-inhibitory subunit of NF-κBα,pIKBα ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠核因子κB(NF-κB)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Nuclear factor-kappa B,NF-κB ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠樹突狀細胞表面特異性C型凝集-細胞間黏附分子3結合非整合分子(DC-SIGN/CD209)英文名稱：Rat DC specific intercellular adhesion molecule 3-grabbing nonintegrin,DC-SIGN/CD209 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠Ⅰ型前膠原N端前(PⅠNP)ELISA試劑盒英文名稱：Rat procollagen Ⅰ N-terminal peptide,PⅠNP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat A Disintegrin And Metalloprotease 9,ADAM9 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
前列腺成纖維細胞AUP1/Ancient ubiquitous protein 1  原始廣泛存在蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

Biglycan  骨/軟骨蛋白多糖1抗體規(guī)格: 0.2ml

ALT1  谷基轉移1抗體規(guī)格: 0.1ml

Eph receptor A2+A3+A4  內(nèi)皮細胞受體蛋白酪A2+A3+A4抗體規(guī)格: 0.2ml

phospho-Eph receptor A2+A3+A4 (Tyr588 + Tyr596)  磷化內(nèi)皮細胞受體蛋白酪A2+A3+A4抗體規(guī)格: 0.1ml

phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779)  磷化內(nèi)皮細胞受體蛋白酪A3+A4+A5抗體規(guī)格: 0.1ml

FLAP/5-lipoxygenase activating protein  5脂氧合激活蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

IKK alpha + IKK beta  KB抑制蛋白激α/β抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。