PIK3C3和Vps34抑制劑(SAR405)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10379

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：PIK3C3和Vps34抑制劑(SAR405)

英文名稱：SAR405

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10379

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：SAR405

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

SAR405是一種PIK3C3/Vps34抑制劑，IC50為1.2nM。SAR405是自噬機(jī)制的近端抑制劑。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1523406-39-4

純度：98.48%

分子量：443.85

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

曲霉黑色瘤硫軟骨蛋白多糖抗體Human IL-24(Interleukin 24) 核因子κB抑制物激β(IKK-β)

大豆慢生根瘤菌突觸粘附分子3抗體Human IL-27(Interleukin-27 subunit alpha) 核因子κB抑制物激α(IKK-α)

木拉克德克斯酵母跨膜硫軟骨蛋白聚糖C抗體Human IL-28A(Interleukin-28A) 核因子κB受體活化劑配體(RANKL)

大腸埃希氏菌噬菌體神經(jīng)腫瘤Nova1抗原抗體Human IL-29(Interleukin 29) 核因子κB(NF-κB)

球孢白僵菌B淋巴鏈接激活蛋白抗體Human IL-3(Interleukin 3) 核糖體合成蛋白NSA2同源物(NSA2)

嘴突凸臍蠕孢中性鞘磷脂2抗體Human IL-31(Interleukin-31) 核糖體蛋白S9(RPS9)

球毛殼*核受體蛋白NR2E1抗體Human IL-4(Interleukin 4) 核糖體蛋白S25(RPS25)

金黃桿菌屬神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白2抗體Human IL-33(Interleukin-33) 核糖核抑止劑(RNH1/PRI/RNH)

枯草芽孢桿菌腦特異性蛋白BPX抗體Human IL-5(Interleukin 5) 核糖核(RNASE1/RIB1/RNS1)

鈉線菌屬核纖層蛋白A識(shí)別因子抗體Human IL-6R alpha(Interleukin-6 receptor subunit alpha) 核糖核(RNASE)

萎蔫短小桿菌NOGO相互作用線粒體蛋白1抗體Human MDC(Macrophage Derived Chemokine) 核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)

糙皮側(cè)耳神經(jīng)元X連鎖蛋白/兒童自閉癥相關(guān)蛋白抗體Human Mer/MERTK(Tyrosine-protein kinase Mer) 核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)

金龜子綠僵菌神經(jīng)元Y連鎖蛋白抗體（兒童自閉癥相關(guān)蛋白）Human KLK6(Kallikrein-6) 核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)

稍黃鏈霉菌神經(jīng)連接蛋白2抗體Human C-ERC(Mesothelin) 核基質(zhì)蛋白22(NMP22)

戊糖乳桿菌NIPA樣蛋白3抗體Human PIM-1(Serine/Threonine-protein Kinase Pim-1) 核黃激(RFK)

枯草芽孢桿菌軸突生長誘導(dǎo)因子3抗體Human SERPINA4(Kallistatin) 和肽(copeptin)

團(tuán)青霉Penicillium│commune 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR綠原

黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR秦皮乙

毛霉屬Mucor│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR秦皮
PIK3C3和Vps34抑制劑(SAR405)抗生鏈霉 (R)-(+)-縮水甘油胰島樣生長因子2

生黃色鏈霉 (R)-(-)-,2-縮酮胰島樣生長因子結(jié)合蛋白-3

曲霉 3--5-三氟胰島原

鮑姆桑黃乙酰基二二乙酯胰島自身抗體

平臍蠕孢無水肌胰淀

亮白曲霉 3-氨基-4-甲基戊胰高血糖

羅爾夫青霉醋己定胰高血糖樣肽1

扣囊復(fù)膜孢酵母 N-叔丁氧羰基-O-對(duì)甲苯磺?；z甲酯胰高血糖樣肽1受體

擬棒形節(jié)叢孢赤蘚紅B鈉鹽胰脂肪

柱隔孢 3-(基硅基)炔乙脫氫

克魯斯假絲酵母四氫對(duì)苯醌乙脫氫1

大腸埃希氏桿 2,5-二肼鹽鹽乙脫氫

樟疫霉 D-葡萄糖-6-磷乙脫氫2

克雷伯氏屬 4-雄烯-4--3,17-二酮乙酰CoA

枯草芽胞桿 S-2-氨基-1-苯乙乙酰CoA羧化
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)