ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全：生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
Streptomyces lanatus 羊毛鏈霉菌Streptomyces lanatus分離基物:土壤凍干安全等級(jí):1模式菌株:，產(chǎn)生防線菌素X復(fù)合物ISP-2培養(yǎng)基:：酵母提取物 4.0 g,麥芽提取物 10.0 g,葡萄糖 4.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾 1.0 L,pH7.3。121℃，15分鐘滅菌。生長(zhǎng)條件:28℃，好氧 純度：98%

Morchella sp. 羊肚菌屬M(fèi)orchella sp.斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no研究；。食用。綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷二氫鉀 3g，鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。傳代方法①凍干管：75%酒精擦拭管壁，后用砂輪在凍干管壁劃兩圈，掰斷，用200μL無(wú)菌或培養(yǎng)基:充分溶解，平板涂布，活化培養(yǎng)。 ②斜面：試管口用75%酒精擦拭后，火焰灼燒，后用無(wú)菌接種鏟切塊，挑取接入平板或斜面，培養(yǎng)。生長(zhǎng)條件:25℃，好氧。生長(zhǎng)特性8天長(zhǎng)滿斜面，菌絲灰白色、稀疏。存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；定期移植法 純度：98%

Cordyceps│militaris 蛹蟲草(北冬蟲夏草，北蟲草)Cordyceps│militaris斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no、藥用，適合液體發(fā)酵菌絲體。CM0017生長(zhǎng)條件:25℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；定期移植法 純度：97%

Cordyceps militaris 蛹蟲草（北冬蟲夏草，北蟲草）（斜面）Cordyceps militaris斜面培養(yǎng)物/凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no研究；。、藥用，適合液體發(fā)酵菌絲體。綜合PDA瓊脂：馬鈴薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，KH2PO4 3.0g，MgSO4.7H2O 1.5g，維生素B1 微量，瓊脂 15.0g，pH6.0。生長(zhǎng)條件:25℃，好氧生長(zhǎng)特性15天長(zhǎng)滿斜面，菌絲潔白、濃密、豐厚、菌絲絨毛狀。液體深層發(fā)酵溫度23-25℃，pH值為5.5-7，發(fā)酵周期3-5天。存儲(chǔ)條件:2-8℃，定期移植法，液氮超低溫凍結(jié)法； 純度：97%

Campylobacr coli 結(jié)腸彎曲菌Campylobacr coli分離基物:狨猴的糞便凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no《GB4789.28培養(yǎng)基:和試劑的質(zhì)量要求》標(biāo)準(zhǔn)菌株。質(zhì)控菌株，腸道和新興傳染病研究。1、哥倫比亞血平板 2、TSA＋5%脫纖維羊血生長(zhǎng)條件:37℃，微需氧存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：96%

Rhizobium arachis 花生根瘤菌Rhizobium arachis安全等級(jí):1模式菌株:no根瘤菌培養(yǎng)基:：Yeast eztract （酵母膏） 1g Soil eztract （土壤浸提液） 200ml Mannitol （甘露醇） 10g Agar （瓊脂） 15g Distilled war （蒸餾） 800ml pH 7.2[No]：Soil extract：Suspend 50g finely and dried gardon soil in 200ml of tap war. Autoclave at 121℃ for 1 hr. Decant through cotton-cloth, filler though paper, make up volume to 200ml. Resrilize for 20 minus at 121℃ , then mixed with othringredients and distribud. (土壤浸提液的制法：取土壤50克，加200毫升，15磅蒸煮1時(shí)，經(jīng)濾紙過(guò)濾后加補(bǔ)足到200毫升。)生長(zhǎng)條件:25-28℃，好氧，48h 純度：96%

Actinomyces oris = Actinomyces viscosus 粘性放線菌Actinomyces oris = Actinomyces viscosus分離基物:人類痰凍干安全等級(jí):1模式菌株:no哥倫比亞血平板，建議購(gòu)買即用型平板。生長(zhǎng)條件:37℃，5%CO2，鏡檢為陽(yáng)性桿菌，純.24h 純度：96%

Azotobacr vinelandii 棕色固氮菌Azotobacr vinelandii凍干安全等級(jí):1模式菌株:no胰胨大豆瓊脂（TSA）：胰蛋白胨(酪蛋白胰酶消化物) 15.0g，大豆蛋白胨(大豆木瓜蛋白酶消化物) 5.0g， 5.0g，瓊脂 15.0g，pH7.3±0.2。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:30℃，好氧 純度：98%
Sam人可溶性粘附分子ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理孟加拉紅（虎紅）培養(yǎng)基人臍動(dòng)脈平滑肌外周血白ABL1(v-abl Abelson murine leukemia viral oncogene homolog 1)  ABL1抗原

KF鏈球菌瓊脂大鼠垂體胰島βFUCA1/Alpha L fucosidase I peptide  α-L巖藻糖苷酶抗原

KF鏈球菌瓊脂大鼠腦膜胰腺星狀Rabbit IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(流式同型對(duì)照)

BCYE瓊脂基礎(chǔ)大鼠腦脊神經(jīng)元胰腺導(dǎo)管上皮Bassoon(BSN)  

GVPC瓊脂基礎(chǔ)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元頜下腺上皮Bax peptide  Bax（多肽抗原）

GVPC添加物大鼠顆粒腮腺Leptin peptide/FITC  熒光素FITC標(biāo)記瘦素抗原

胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）大鼠海馬神經(jīng)元視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮Bcl-2(抗原)  Bcl-2（多肽抗原）

改良平板計(jì)數(shù)瓊脂（MPCA）大鼠黑質(zhì)神經(jīng)元梁網(wǎng)BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor)  腦源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子)（多肽片斷抗原）
操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)