當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TSam人可溶性粘附分子ELISA試劑盒實驗原理
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結果,可提供免費技術咨詢服務!
產(chǎn)品名稱 | Sam人可溶性粘附分子ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human soluble adhesion molecules, Sam Elisa Kit |
貨號 | FS-H63229 |
公司“質量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等
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樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Streptomyces lanatus 羊毛鏈霉菌Streptomyces lanatus分離基物:土壤凍干安全等級:1模式菌株:,產(chǎn)生防線菌素X復合物ISP-2培養(yǎng)基::酵母提取物 4.0 g,麥芽提取物 10.0 g,葡萄糖 4.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾 1.0 L,pH7.3。121℃,15分鐘滅菌。生長條件:28℃,好氧 純度:98%
Morchella sp. 羊肚菌屬Morchella sp.斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no研究;。食用。綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:25℃,好氧。生長特性8天長滿斜面,菌絲灰白色、稀疏。存儲條件:液氮超低溫凍結法;定期移植法 純度:98%
Cordyceps│militaris 蛹蟲草(北冬蟲夏草,北蟲草)Cordyceps│militaris斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no、藥用,適合液體發(fā)酵菌絲體。CM0017生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;定期移植法 純度:97%
Cordyceps militaris 蛹蟲草(北冬蟲夏草,北蟲草)(斜面)Cordyceps militaris斜面培養(yǎng)物/凍干物安全等級:1模式菌株:no研究;。、藥用,適合液體發(fā)酵菌絲體。綜合PDA瓊脂:馬鈴薯提取液 1.0L,葡萄糖 20.0g,KH2PO4 3.0g,MgSO4.7H2O 1.5g,維生素B1 微量,瓊脂 15.0g,pH6.0。生長條件:25℃,好氧生長特性15天長滿斜面,菌絲潔白、濃密、豐厚、菌絲絨毛狀。液體深層發(fā)酵溫度23-25℃,pH值為5.5-7,發(fā)酵周期3-5天。存儲條件:2-8℃,定期移植法,液氮超低溫凍結法; 純度:97%
Campylobacr coli 結腸彎曲菌Campylobacr coli分離基物:狨猴的糞便凍干物安全等級:2模式菌株:no《GB4789.28培養(yǎng)基:和試劑的質量要求》標準菌株。質控菌株,腸道和新興傳染病研究。1、哥倫比亞血平板 2、TSA+5%脫纖維羊血生長條件:37℃,微需氧存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:96%
Rhizobium arachis 花生根瘤菌Rhizobium arachis安全等級:1模式菌株:no根瘤菌培養(yǎng)基::Yeast eztract (酵母膏) 1g Soil eztract (土壤浸提液) 200ml Mannitol (甘露醇) 10g Agar (瓊脂) 15g Distilled war (蒸餾) 800ml pH 7.2[No]:Soil extract:Suspend 50g finely and dried gardon soil in 200ml of tap war. Autoclave at 121℃ for 1 hr. Decant through cotton-cloth, filler though paper, make up volume to 200ml. Resrilize for 20 minus at 121℃ , then mixed with othringredients and distribud. (土壤浸提液的制法:取土壤50克,加200毫升,15磅蒸煮1時,經(jīng)濾紙過濾后加補足到200毫升。)生長條件:25-28℃,好氧,48h 純度:96%
Actinomyces oris = Actinomyces viscosus 粘性放線菌Actinomyces oris = Actinomyces viscosus分離基物:人類痰凍干安全等級:1模式菌株:no哥倫比亞血平板,建議購買即用型平板。生長條件:37℃,5%CO2,鏡檢為陽性桿菌,純.24h 純度:96%
Azotobacr vinelandii 棕色固氮菌Azotobacr vinelandii凍干安全等級:1模式菌株:no胰胨大豆瓊脂(TSA):胰蛋白胨(酪蛋白胰酶消化物) 15.0g,大豆蛋白胨(大豆木瓜蛋白酶消化物) 5.0g, 5.0g,瓊脂 15.0g,pH7.3±0.2。121℃,15min。生長條件:30℃,好氧 純度:98%
Sam人可溶性粘附分子ELISA試劑盒實驗原理孟加拉紅(虎紅)培養(yǎng)基人臍動脈平滑肌外周血白ABL1(v-abl Abelson murine leukemia viral oncogene homolog 1) ABL1抗原
KF鏈球菌瓊脂大鼠垂體胰島βFUCA1/Alpha L fucosidase I peptide α-L巖藻糖苷酶抗原
KF鏈球菌瓊脂大鼠腦膜胰腺星狀Rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記兔IgG(流式同型對照)
BCYE瓊脂基礎大鼠腦脊神經(jīng)元胰腺導管上皮Bassoon(BSN)
GVPC瓊脂基礎大鼠皮質神經(jīng)元頜下腺上皮Bax peptide Bax(多肽抗原)
GVPC添加物大鼠顆粒腮腺Leptin peptide/FITC 熒光素FITC標記瘦素抗原
胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)大鼠海馬神經(jīng)元視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮Bcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原)
改良平板計數(shù)瓊脂(MPCA)大鼠黑質神經(jīng)元梁網(wǎng)BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原)
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準
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