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產(chǎn)地	國(guó)產(chǎn)	加工定制	是
適用領(lǐng)域	科研	貨號(hào)	FS-01X9729

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠骨肉瘤細(xì)胞

產(chǎn)品英文：UMR-106

貨號(hào)：FS-01X9729

細(xì)胞培養(yǎng)條件：DMEM（含NaHCO3 1.5g/L）+10%FBS+1%P/S

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：

1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。

3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

人β萘酚(β-Nph)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Beta-naphthol，β-Nph ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人凝聚(CLU)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human clusterin，CLU ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人二磷腺(ADP)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Adenosine diphosphate，ADP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人5羥基吲哚乙(5-HIAA)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human 5-hydroxyindolacetic acid，5-HIAA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人12羥二十烷四烯(12-HETE)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human 20-hydroxyeicosatetraenoic acid，12-HETE ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人羥(Hyp)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human hydroxyproline，Hyp ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人一氧化氮(NO)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human nitric oxide，NO ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人維生C(VC)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Vitamin C，VC ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人維生B6(VB6)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Vitamin B6，VB6 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人可溶性P選擇(sP-selectin)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human soluble P-selectin，sP-selectin ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human tissue inhibitors of metalloproteinase 1，TIMP-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人維生D(VD)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Vitamin D，VD ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人維生K1(VK1)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Vitamin K1，VK1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人維生B12(VB12)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Vitamin B12，VB12 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人維生D3(VD3)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Vitamin D3，VD3 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人維生D2(VD2)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Vitamin D2，VD2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人維生E(VE)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Vitamin E，VE EELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人維生A(VA)ELISA試劑盒英文名稱(chēng)：Human Vitamin A，VA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
大鼠骨肉瘤細(xì)胞DDIT4L DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄樣蛋白4抗體規(guī)格: 0.2ml

DEAF1/Deformed Epidermal Autoregulatory Factor 1 畸形表皮自調(diào)節(jié)因子1抗體規(guī)格: 0.2ml

EID3 E1A樣分化抑制因子3抗體規(guī)格: 0.2ml

ERCC6L 發(fā)育相關(guān)蛋白ERCC6L抗體（乙致畸因子）規(guī)格: 0.2ml

FAM107A 腎細(xì)胞癌下調(diào)蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

FRK/PTK5 胃腸道相關(guān)酪抗體（蛋白酪5）規(guī)格: 0.2ml

GANP 生發(fā)中心相關(guān)核蛋白MCM3抗體規(guī)格: 0.2ml

GIDRP88 生長(zhǎng)抑制和分化相關(guān)蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

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