ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購優(yōu)勢如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
Lentinus edodes (Berkeley) Singer 香菇（斜面）Lentinus edodes (Berkeley) Singer只提供斜面安全等級(jí):1模式菌株:no食用綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷二氫鉀 3g，鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長條件:25℃，好氧 純度：>95.0%(GC)

Penicillium grisofulvum Dierckx 灰黃青霉Penicillium grisofulvum Dierckx凍干安全等級(jí):1模式菌株:no綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷二氫鉀 3g，鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長條件:25-26℃，好氧 純度：99%

Kocuria rhizophila 嗜根考克氏菌（藤黃八疊球菌）Kocuria rhizophila凍干安全等級(jí):1模式菌株:no土霉素測定菌營養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾 1.0L，pH7.0。生長條件:30-37℃，好氧,曾用名藤黃八疊球菌 純度：98%

Prous vulgaris Hauser 普通變形桿菌Prous vulgaris Hauser凍干安全等級(jí):1模式菌株:no營養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾 1.0L，pH7.0。生長條件:30℃，好氧 純度：98%

Mucor racemosus f. racemosus 總狀毛霉（斜面）Mucor racemosus f. racemosus斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷二氫鉀 3g，鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長條件:28-30℃,好氧 純度：97%

Vibriofluvialis 河流弧菌Vibriofluvialis分離基物:人類糞便，孟加拉國安全等級(jí):1模式菌株:102生長條件:37℃ 純度：97%

Lysinibacillusmacroides LysinibacillusmacroidesLysinibacillusmacroides分離基物:牛糞安全等級(jí):1模式菌株:2生長條件:30℃ 純度：98%

Massiliahaematophila MassiliahaematophilaMassiliahaematophila安全等級(jí):1模式菌株:no108生長條件:28-30 純度：98%
IL-3人白介素3ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理Agar for fungi acc.to KIMMIG( base) modified 真菌改性瓊脂（化）人間充質(zhì)干-脂肪裂解物3-甲基-2-并噻唑啉腙鹽鹽水合物ANPEN/CD13(Aminopeptidase N)  氨肽酶N抗原

Agar GASSNER Water-blue metachrome-yellow lactose agar acc.to GASSNER GASSNER 瓊脂/水溶藍(lán)偏烙黃乳糖瓊脂人間充質(zhì)干-肝臟裂解物3-甲基-2-并噻唑啉腙鹽鹽水合物CD14(cluster of differentiation antigen 14)  CD14/內(nèi)素受體抗原

GLOLITTI-CANTONI broth Staphylococcus enrichment broth base GLOLITTI-CANTONI 肉湯/葡萄糖球菌富集肉湯基礎(chǔ)人臍帶間充質(zhì)干裂解物3-甲基-2-并噻唑啉腙鹽鹽水合物CD28  CD28抗原

GN enrichment broth acc.to HAJUNA GN富集肉湯人肺間充質(zhì)干裂解物乙二胺四乙鐵鹽CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule)  活化白粘附分子抗原

GSP agar Paeudomonas Aeromonas selective agar acc.to KIEL WEIN( base) 過氧化苯甲酰酚紅瓊脂/假單胞菌氣單胞菌選擇瓊脂（基礎(chǔ)）人上皮裂解物乙二胺四乙鐵鹽CD177/NB1 peptide  嗜中性?？乖瑿D177抗原

Hektoen enteric agar Hektoen 腸瓊脂人成纖維裂解物3，5-二甲基-4- 硝基吡-2-甲CD24  CD24抗原

ITC broth ( base) irgasan-ticarcillin-potassium chlorate broth人臍靜脈內(nèi)皮裂解物3，5-二甲基-4- 硝基吡-2-甲CD2AP (CD2-associated protein)  白分化抗原CD2AP

ITC肉湯（基礎(chǔ)）人臍動(dòng)脈內(nèi)皮裂解物4-乙酰苯CD33 peptide(human)  CD33抗原（人）
操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)