PG多聚半乳糖醛酸酶檢測試劑盒微量法-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-01S63897

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	檢測方法	貨號
PG多聚半乳糖醛酸酶檢測試劑盒微量法	100管/48樣	微量法	FS-01S63897

商品介紹：

測定意義

多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2.1.15）是一種細(xì)胞壁結(jié)合蛋白，可以催化果膠分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，參與果膠的降解，使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)解體，導(dǎo)致果實(shí)軟化，與果實(shí)成熟、葉和花的脫落、病原物防御，細(xì)胞伸展發(fā)育以及木質(zhì)化有關(guān)，在植物抗病性和食品貯藏保鮮領(lǐng)域具有較高的研究價值。

測定原理：

多聚半乳糖醛酸酶水解果膠酸生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與DNS試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在540nm有特征吸收峰，測定540nm處吸光值變化可計(jì)算得多聚半乳糖醛酸酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

樣本前處理步驟：
樣本處理前須知

處理任何樣本時,都必須注意:

(1) 實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭(2)實(shí)驗(yàn)前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn) 行清潔,避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

(a)組織樣品處理方法:

1、稱取5±0.05g組織樣品于50ml離心管中,先加入3ml已稀釋好的樣品提取液震蕩2min;再加入10ml乙腈,充分震蕩5min,

2、加入2g中性氧化鋁;震蕩2min ,室溫4000r/min以上,離心10min;;

3、取6ml上清液于干凈離心管中,加入5ml二氯甲烷震蕩3min ,室溫4000r/min以上,離心10min;;

4、取下層清澈液體于玻璃管中,加入20ul氧化劑混勻,在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;

5、加入1ml復(fù)溶液,充分溶解干燥殘留物。

6、取100ul 上清液與100ul 已稀釋好的復(fù)溶液充分混合30s,

7、取50ul進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù): 1倍

(b)水樣品處理方法:

1、取50ul 上清液與450ul 已稀釋好的復(fù)溶液充分混合30s,

2、取50ul進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù):10倍

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實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則:
1、將液體加到酶標(biāo)孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

2、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

3、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

4、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

5、實(shí)驗(yàn)時，要使底物避光保存。

6、洗板時，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機(jī)時，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。

7、要在實(shí)驗(yàn)前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。

8、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。

10、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。