ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類(lèi)型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全：生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
Thermoactinomyces│sp. 高溫放線菌屬Thermoactinomyces│sp.分離基物:高溫大曲曲塊凍干物安全等級(jí):1904生長(zhǎng)條件:55℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Hafnia│alvei 蜂房哈夫尼菌Hafnia│alvei凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no測(cè)定賴氨。CM0180生長(zhǎng)條件:28-30℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Bacillus mucilaginosus 膠凍樣芽孢桿菌Bacillus mucilaginosus凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no細(xì)菌肥料營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂： 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:30℃，好氧存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Sphingomonas sanxanigenens 胞外多聚物鞘氨醇單胞菌Sphingomonas sanxanigenens形態(tài)菌體呈球狀至桿狀，單個(gè)、成對(duì)或呈短鏈狀排列，革蘭氏陰性。凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no黃原膠。CM0002生長(zhǎng)條件:30℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Gibberella fujikuroi 藤倉(cāng)赤霉Gibberella fujikuroi凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no產(chǎn)赤霉素。綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷二氫鉀 3g，鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:28℃，好氧存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；定期移植法 純度：98%

Lactobacillus│sanfrancisco 舊金山乳桿菌Lactobacillus│sanfrancisco分離基物:稀奶油凍干物安全等級(jí):1模式菌株:noCM0006生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Lactobacillus│paracasei subsp. paracasei 副干酪乳桿菌副干酪亞種Lactobacillus│paracasei subsp. paracasei分離基物:益生菌品凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no發(fā)酵乳CM0006生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Vibrio│mimicus 擬態(tài)弧菌Vibrio│mimicus凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no研究、質(zhì)量控制。CM0002生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：99%
IL-6人白介素6ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理羅斯-孟加拉霉素瓊脂人肝臟裂解物2,6-二-3-吡CCR-2/5(CC chemokine receptor 2/5)  CC趨化因子受體2/5抗原

DEV nutrient agar for microbiology DEV營(yíng)養(yǎng)瓊脂人肝臟星形裂解物2,6-二-3-吡CCL1/TCA3/I-309  嗜粒趨化蛋白CCL1抗原

DEV nutrient gelatin DEV營(yíng)養(yǎng)明膠人心臟微血管內(nèi)皮裂解物1,3-二溴-5-苯CCL5/RANTES(regulated on activation normal T cell expressed and secreted)  活化T表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)因子抗原

DEV tryptophan broth DEV色氨肉湯人主動(dòng)脈內(nèi)皮裂解物1,3-二溴-5-苯CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta)  巨噬炎性蛋白1β抗原

Dextrose casein-peptone agar 葡萄糖酪蛋白瓊脂人主動(dòng)脈平滑肌裂解物3-甲氧基氮雜環(huán)丁烷鹽鹽MIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha)  巨噬炎性蛋白3α抗原

DHL agar acc.to SAKAZAKI 甲基吡硫化氫乳糖瓊脂人心肌裂解物3-甲氧基氮雜環(huán)丁烷鹽鹽CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12)  單核趨化蛋白5抗原

DIASALM acc.to VAN NETTEN and VAN der ZEE DIASALM培養(yǎng)基人心肌-裂解物3-甲氧基氮雜環(huán)丁烷鹽鹽CCL14/HCC-1(C-C motif chemokine 14)  嗜粒趨化蛋白14抗原

DCA agar acc.to Weenk et al 梭狀芽孢桿菌鑒別瓊脂人心臟成纖維裂解物四正辛基溴化銨ABCD-1/CCL22  嗜粒趨化蛋白22抗原
操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)