ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全：生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
Tatumellaptyseos 痰塔特姆氏菌Tatumellaptyseos分離基物:喉嚨，美國(guó)安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法生長(zhǎng)條件:37℃ 純度：95%

Staphylococcuscohniisubsp.cohnii 科氏葡萄球菌科氏亞種Staphylococcuscohniisubsp.cohnii分離基物:人體皮膚安全等級(jí):1培養(yǎng)方法生長(zhǎng)條件:37℃ 純度：98%

Bacroide suniformis 單形擬桿菌Bacroide suniformis分離基物:人類糞便安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法生長(zhǎng)條件:37℃ 純度：99%

Corynebacriumpseudotuberculosis 假結(jié)合棒桿菌Corynebacriumpseudotuberculosis分離基物:羊的感染腺安全等級(jí):1培養(yǎng)方法生長(zhǎng)條件:37℃ 純度：99%

Corynebacriumulcerans 潰瘍棒狀桿菌Corynebacriumulcerans分離基物:人的喉嚨，英國(guó)安全等級(jí):1模式菌株:no113生長(zhǎng)條件:37℃ 純度：97%

Corynebacriumpropinquum 接近棒桿菌Corynebacriumpropinquum分離基物:人的呼吸道安全等級(jí):1模式菌株:no113生長(zhǎng)條件:37℃ 純度：Pt 24.2%

Arcanobacriumhaemolyticum 溶血隱秘桿菌Arcanobacriumhaemolyticum分離基物:臨床分離，芝加哥大學(xué)，1988年安全等級(jí):1模式菌株:no質(zhì)量控制菌株。35生長(zhǎng)條件:37℃,5%CO2 純度：Pt 24.2%

Enrococcuscasseliflavus 鉛黃腸球菌Enrococcuscasseliflavus安全等級(jí):1模式菌株:no質(zhì)量控制菌株35生長(zhǎng)條件:37℃ 純度：99%
NT-3人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理Bromocresol-purple azide broth 溴甲酚紅紫疊氮肉湯人淋巴內(nèi)皮裂解物DL-阿拉伯糖Caspase-12(hunman)  半胱胺蛋白酶蛋白-12抗原(人)

Brucella agar 布魯氏菌瓊脂人淋巴成纖維裂解物N-Acetyl-Val-Ala-Asp-alTmR2(GDNFR Beta；TRN-R；GFR-alpha-2；NTNR-2)  膠質(zhì)系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（多肽）

Calcium caseinate agar acc.to FRAZIER and RUPP,modified人口腔角質(zhì)裂解物4,4′-(六異亞基)二酚TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha)  人腫瘤壞死因子-α（多肽抗原）

酪蛋白鈣瓊脂人牙齦成纖維裂解物4,4′-(六異亞基)二酚rh-TNF-Alpha(rh-Tumor Necrosis Factor alpha)  重組人腫瘤壞死因子

Campylobacter selective agar(base) 彎曲菌選擇培養(yǎng)基人牙周膜成纖維裂解物4,4′-(六異亞基)二酚rh-TNF alpha protein GST Tagged  重組人腫瘤壞死因子

Campylobacter selective supplement 彎曲菌選擇培養(yǎng)添加劑人食道上皮裂解物4,4′-(六異亞基)二酚TRA16  激素受體相關(guān)蛋白

　人食道平滑肌裂解物（環(huán)基）三苯基溴化膦rh-IL-1Ra(Recombinant Human Interleukin-1 receptor antagonist His Tag)  重組人白介素-1受體拮抗劑

Candida selective agar acc.to NICKERSON 念珠菌選擇瓊脂人腸微血管內(nèi)皮裂解物2-甲基-4-溴苯甲rhBMP-2/BMP2  重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2
操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)