細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：小鼠精原細(xì)胞系    

產(chǎn)品英文：GC-1 spg

貨號(hào)：FS-01X9636

細(xì)胞培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS+1%P/S

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫   

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒 Human Vascuolar cell adhesion molecule 1，VCAM-1 ELISA Kit

人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒Human Tumor necrosis factor β，TNF-β ELISA Kit

人腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 Human Tumor necrosis factor α，TNF-α ELISA Kit

人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒Human Transforming Growth factor β1，TGF-β1 ELISA Kit

人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)ELISA試劑盒Human transforming growth factor α，TGF-α ELISA Kit

人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒Human Stem cell factor/mast cell growth factor，SCF/MGF ELISA Kit

人可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒 Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand，sCD40L ELISA Kit

人可溶性CD30配體(sCD30L)ELISA試劑盒 Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand，sCD30L ELISA Kit

人P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA試劑盒Human P-Selectin/CD62P/GMP140 ELISA Kit

人血血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒Human Platelet-Derived Growth Factor AB，PDGF-AB ELISA Kit

人血血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒Human Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α，PDGFsR-α ELISA Kit

人巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒Human Macrophage-Derived Chemokine，MDC ELISA Kit

人巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒Human Macrophage Colony-Stimulating Factor，M-CSF ELISA Kit

人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒Human L-Selectin ELISA Kit

人白介素9(IL-9)ELISA試劑盒Human Interleukin 9，IL-9 ELISA Kit

人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒 Human Interleukin 8，IL-8 ELISA Kit

人白介素6(IL-6)ELISA試劑盒 Human Interleukin 6，IL-6 ELISA Kit

人白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒Human Interleukin 5，IL-5 ELISA Kit

人白介素4(IL-4)ELISA試劑盒Human Interleukin 4，IL-4 ELISA Kit
小鼠精原細(xì)胞系GAPDH(3E12)-Loading Control  3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內(nèi)參抗體) 0.1ml

GAPDH   3-磷酸甘油醛脫氫酶抗體(內(nèi)參抗體) 0.1ml

beta-Actin (Loading Control)  β-肌動(dòng)蛋白抗體（內(nèi)參抗體） 0.1ml

14-3-3(Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon)  14-3-3蛋白抗體 0.1ml

phospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58)  磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 0.1ml

14-3-3 family protein  蘋(píng)果14-3-3蛋白抗體(植物) 1ml

GLI1/Zfp5  腦膠質(zhì)瘤相關(guān)蛋白抗體（鋅指蛋白5） 0.1ml

Involucrin  囊包蛋白/內(nèi)披蛋白抗體 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。