您好, 歡迎來到儀表網(wǎng)! 登錄| 免費(fèi)注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>核酸檢測(cè)試劑盒>>熒光PCR法>> 50T華支睪吸蟲 (CS)核酸檢測(cè)試劑盒
對(duì)蝦黃頭病病毒(YHV)核酸定性檢測(cè)試劑盒
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:華支睪吸蟲 (CS)核酸檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P10472
產(chǎn)品分類:熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
?
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR:
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
-685℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
白色假絲酵母菌培養(yǎng)基: CM0013模式菌株: no痰提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2生長(zhǎng)條件: 36℃ -80℃冰箱凍結(jié)法
雙孢蘑菇培養(yǎng)基: 0017食用. 中溫型, 抗逆性強(qiáng)提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
費(fèi)氏中華根瘤菌根瘤菌多樣性研究模式菌株: no大豆提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 63生長(zhǎng)條件: 28℃
黃桿菌生長(zhǎng)條件: 4℃培養(yǎng)基: 444土壤提供形式: 凍干物模式菌株: no 真空冷凍干燥法
大腸埃希菌抗藥性檢驗(yàn)?zāi)J骄?/font>: no豬提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 335生長(zhǎng)條件: 37
聚團(tuán)拉布倫茨氏菌生物轉(zhuǎn)化微生物/硫氧化微生物模式菌株: no沉積物/TVG土黃色鈣質(zhì)軟泥提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 471生長(zhǎng)條件: 25℃
-686℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
優(yōu)雅食烷菌潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自柴油原油混合富集菌群模式菌株: no水樣/下層海水提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 1001生長(zhǎng)條件: 25℃
靈芝培養(yǎng)基: 0014保健、藥用提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
模式菌株: no
楊爛皮殼蕉孢菌植物病原物,用于該菌種群遺傳學(xué)研究模式菌株: no楊樹干部提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 25
華美鏈霉菌生長(zhǎng)條件: 28℃培養(yǎng)基: 0012提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
香茅醇假單胞菌用于微生物采油和含油污水處理模式菌株: no油田水樣提供形式: 斜面培養(yǎng)物;凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 2生長(zhǎng)條件: 37℃
-687℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
紅根須腹菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no組織塊提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25-30 定期移植法
5-溴-2-甲氧基 N-甲基-1-鹽鹽 4-(基)鹽
(R)-3-基四鹽鹽 S-2-芐基琥珀 基叔丁酯
L-2,4-二丙 4'-羥基聯(lián)-4-羧 4-基
阿替洛爾 4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]鹽鹽 磺酰
Tetraallyltin 四烯丙基錫 7393-43-3
Chitosan 殼聚糖 9012-76-4
STANNOUS CHLORIDE 化亞錫 7772-99-8
Butyltin oxide 丁基錫 2273-43-0
大鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒 ,英文名: Hp-IgG ELISA Kit
人果糖1,6二磷縮酶(FDA)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanFructose-1,6-bisphosphatealdolase,FDAELISAKit 96T/48T
大鼠白介素13(IL-13)免疫試劑盒 Rat Ierleukin 13,IL-13 ELISA KIT
CLIAKitfoAT(Mousethrombin-aithrombincomplex)ELISAKit小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物規(guī)格:48T/96T
人體IL-23基因甲基化檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitANF人抗核因子抗體規(guī)格:48T/96T
華支睪吸蟲 (CS)核酸檢測(cè)試劑盒牛蒡苷元7770-78-7中文別名:牛蒡子苷元
英文名:Arctigenin
登錄號(hào):7770-78-7
分子式:C21H24O6
分子量:372.41
分子結(jié)構(gòu):
外觀:無色片狀結(jié)晶()
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來源:牛蒡子提出的有效成分。
熔點(diǎn):90-92℃;102℃
旋光度:-28.7°(c=1.2,)
藥理藥效:抑制尿中總蛋白排泄,改善高膽固醇血癥,強(qiáng)力抑制超氧化物的產(chǎn)生,抗血小板聚集活性,抗炎作用,體外抑制人型白血病細(xì)胞株HL-60和MOLT-4的生長(zhǎng)。抑制HIV-1的復(fù)制。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
PCR的反應(yīng)條件:
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小,設(shè)定25~30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí),每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長(zhǎng)一些。通常,Anneal溫度太高,有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時(shí),容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時(shí)間太短時(shí),會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時(shí)間太長(zhǎng)時(shí),會(huì)出現(xiàn)Smear。
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),儀表網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購(gòu)買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。