當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TINS人胰島素ELISA試劑盒實驗原理
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
產(chǎn)品名稱 | INS人胰島素ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human Insulin, INS Elisa Kit |
貨號 | FS-H63665 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等?
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Paecilomyces│persicinus 桃色擬青霉Paecilomyces│persicinus凍干物安全等級:1模式菌株:no15生長條件:25-28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Bordela│bronchissptica 支氣管炎博德特氏菌Bordela│bronchissptica凍干物安全等級:2模式菌株:noAssay of colistin and antibiotics, Assay of polymy2生長條件:37℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Lactobacillus│jensenii 詹氏乳桿菌Lactobacillus│jensenii分離基物:健康孕婦分泌物凍干物安全等級:1模式菌株:noCM0006生長條件:37℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法 純度:97%
Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis 德氏乳桿菌乳亞種Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis凍干物安全等級:1模式菌株:;產(chǎn)乳MRS生長條件:37℃,微好氧,2-3天存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:91%
Desulfomicrobium│baculatum 桿狀脫硫微菌Desulfomicrobium│baculatum分離基物:manganese ore凍干物安全等級:1模式菌株:897生長條件:30℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:91%
Burkholderia multivorans 多噬伯克霍爾德氏菌Burkholderia multivorans凍干物安全等級:1模式菌株:no營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件:30℃,好氧存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:91%
Dietzia│natronolimnaea 湖迪茨氏菌Dietzia│natronolimnaea分離基物:soda lake凍干物安全等級:1模式菌株:221生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:99%
Gluconacetobacr│liquefaciens 液化葡糖醋桿菌Gluconacetobacr│liquefaciens凍干物安全等級:1模式菌株:no1生長條件:30℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:99%
INS人胰島素ELISA試劑盒實驗原理MRP4/ABCC4 多藥耐藥相關(guān)蛋白4抗體封口膜雙(亞乙基二氨)化鉑(II)Human RLR (Retinoic Acid Inducible Gene/RIG-Like Receptor) ELISA Kit
MRP5/ABCC5 多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗體鋁薄紙雙(亞乙基二氨)化鉑(II)Human RB1 (Retinoblastoma Protein 1) ELISA Kit
MrpL28 線粒體核糖體蛋白L28抗體無熱原吸頭(S, S)-環(huán)己二胺Human PRB (Retinoblastoma Tumor Suppressor Protein) ELISA Kit
Alpha-MSH/POMC 促黑激素α抗體無熱原吸頭(S, S)-環(huán)己二胺Human CYPA (Cyclophilin A) ELISA Kit
MSH-2 錯配修復(fù)蛋白2抗體細菌內(nèi)素檢查用水(S, S)-環(huán)己二胺Human CYPB (Cyclophilin B) ELISA Kit
MSK1 有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體旋渦混合器(S, S)-環(huán)己二胺Human CYPD (Cyclophilin D) ELISA Kit
Phospho-MSK1 (Ser360) 磷化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體2-苯甲頻哪酯Human NRP2 (Neuropilin 2) ELISA Kit
Phospho-MSK1 (Ser212) 磷化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體鹽地芬諾酯2-苯甲頻哪酯Human CS (Citrate Synthase) ELISA Kit
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
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