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ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
產(chǎn)品名稱 | LDH小鼠乳酸脫氫酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Mouse Lactate Dehydrogenase, LDH Elisa Kit |
貨號(hào) | FS-M64439 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢(shì)如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5公司產(chǎn)品僅用于科研可檢測(cè)指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等?
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
Human 1,25dihydroxyvitamin D3,DVD/DHVD 3 ELISA試劑盒Silymarin純度:95%
Human 1,3Disphosphoglycerate,1,3DPG ELISA試劑盒Silydianin純度:≥95%
Human 1,3βD glucosidase,1,3βDGlu ELISA試劑盒Silychristin純度:≥98%
Human 1,5anhydroglucitol,1,5AG ELISA試劑盒Oxypeucedanin hydrate純度:≥98%
Human 11dehydrothromboxane B2,11DHTXB2 ELISA試劑盒Karanjin純度:≥98%
Human 15lipoxygenase,15LO/LOX ELISA試劑盒Monotropein純度:≥98%
Human 16αHydroxyestrogen 1,16α OHE1 ELISA試劑盒Narcissoside;Isorhamnetin3OβDrutinoside純度:≥98%
MAGa/b 髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b抗體 * 0.1ml Sucrose phosphorylase from L. Mesenteroides
MAGa/LMAG 髓鞘相關(guān)糖蛋白a抗體 * 0.1ml Sulfamethazine sodium salt
MAGE1 黑色素瘤相關(guān)抗原抗體 * 0.1ml Sulfobromophthalein disodium salt hydrate
MAGEA4 黑色素瘤相關(guān)抗原4抗體 * 0.1ml SulfoMBS
Mammaglobin A 珠蛋白1抗體 * 0.1ml Tetraheptylammonium bromide
Mammaglobin B 珠蛋白2抗體 * 0.1ml Tetrapropylammonium hydroxide 25% solution
Mammaglobin A 珠蛋白1抗體 * 0.2ml Thapsigargin, from Thapsia garganica
MAVS 線粒體抗病信號(hào)MAVS蛋白抗體 * 0.2ml Thioflavin T
雪上一枝蒿甲素 Snow bullatine a 規(guī)格:20mg
黃山藥皂苷提取物 Mount Huangshan medicine saponin extract 規(guī)格:200mg
組氨 Histidine 規(guī)格:100mg
蘇氨 Threonine 規(guī)格:100mg
環(huán)維黃楊星D Huan Weihuang young star D 規(guī)格:20mg
土荊皮乙 Cortex Pseudolaricis acetic acid 規(guī)格:20mg
兒茶素 Catechin 規(guī)格:20mg
亮氨 Leucine 規(guī)格:100mg
纈氨 Valine 規(guī)格:100mg
丙氨 Alanine 規(guī)格:100mg
精氨 Arginine 規(guī)格:100mg
三七莖葉皂苷 Three seven stem Ye Zaogan 規(guī)格:50mg
LDH小鼠乳酸脫氫酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理雙皮層蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白DCDC2抗體Porcine OXA (Orexin A) ELISA Kit
神經(jīng)干樹突調(diào)節(jié)蛋白DAGLα抗體Porcine ANG I (Angiotensin I) ELISA Kit
對(duì)接蛋白4抗體Porcine SPARC (Secreted Protein Acidic And Rich In Cysteine) ELISA Kit
DULLARD蛋白抗體Porcine α1BG (Alpha-1-B-Glycoprotein) ELISA Kit
絲氨/蘇氨蛋白激酶MNB抗體Porcine Anti-MPO (Anti-Myeloperoxidase Antibody) ELISA Kit
無胸腺癥相關(guān)蛋白DGCR6/迪格奧爾格綜合征關(guān)鍵基因6抗體Porcine OxLDL (Oxidized Low Density Lipoprotein) ELISA Kit
朊蛋白DPL抗體Porcine KIM-1 (Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit
肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良蛋白激酶抗體Porcine P27 (P27 Protein) ELISA Kit
操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
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