當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>>人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>> 48T/96TPro-ANP人前心鈉肽ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | Pro-ANP人前心鈉肽ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human Pro Atrial Natriuretic Peptide, Pro-ANP Elisa Kit |
貨號 | FS-H63329 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
Aspergillusoryzaevar.effuses(Tirahoschi)Ohara 平展米曲霉(米曲霉平展變種)Aspergillusoryzaevar.effuses(Tirahoschi)Ohara安全等級:1模式菌株:no曲菌。50生長條件:28-30℃ 純度:94%
Schizochytrium sp. 裂殖壺菌Schizochytrium sp.分離基物:estuarinewar,California凍干安全等級:1模式菌株:noproducesomega-3fattyacids2216E瓊脂+5.0g/L葡萄糖。121℃,15min高壓滅菌。生長條件:20.0°C,好氧,2-3天 純度:97%
Penicillium italicum 意大利青霉Penicillium italicum凍干安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:20%馬鈴薯汁1L,葡萄糖20g ,KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 1.5g,硫胺素微量,瓊脂 15g,pH 自然。生長條件:25-26℃,好氧生長特性綜合PDA平板,好氧,28℃,產(chǎn)孢子。 純度:97%
Penicillium digitatum 指狀青霉Penicillium digitatum凍干安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:20%馬鈴薯汁1L,葡萄糖20g ,KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 1.5g,硫胺素微量,瓊脂 15g,pH 自然。生長條件:25°C,好氧生長特性綜合PDA平板,好氧,28℃,產(chǎn)孢子。 純度:97%
Fusariumtricinctum 三線鐮孢菌Fusariumtricinctum安全等級:1模式菌株:no17生長條件:25-28℃ 純度:98%
Lactobacillus│casei 干酪乳桿菌Lactobacillus│casei分離基物:牙洞凍干物安全等級:1模式菌株:no用于免疫學(xué)研究;用于益生菌類食品。CM0006生長條件:37℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Naxibacrvarians NaxibacrvariansNaxibacrvarians分離基物:90歲男性眼睛,挪威安全等級:1模式菌株:108116生長條件:28-30 純度:98%
Lysinibacillusxylanilyticus LysinibacillusxylanilyticusLysinibacillusxylanilyticus分離基物:森林腐殖質(zhì),韓國雞龍山安全等級:1模式菌株:108或127生長條件:25-30 純度:D,99.5%
Pro-ANP人前心鈉肽ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理麥康凱肉湯 (CM0005)雷公藤甲素1-叔丁氧羰基-4-乙Neurocan 神經(jīng)粘蛋白抗原
麥康凱瓊脂 (CM0007)雷公藤乙素1-叔丁氧羰基-4-乙NF2/merlin(neurofibromatosis type 2) 2型神經(jīng)纖維瘤抗原
蛋白胨水Peptone Water雷公藤紅素Perifosine (KRX-0401)NFATc1 活化T核因子1蛋白
LAB-LEMCO( ) 肉湯 Lab-Lemco Broth雷公藤內(nèi)酯甲1H-苯并咪唑-5-羧phospho-NFKB p65 (pSer536) peptide 磷化核因子/磷化k基因結(jié)合核因子抗原
LAB-LEMCO( ) 瓊脂 Lab-Lemco Agar木犀草素1H-苯并咪唑-5-羧NF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB) 核因子50/κ基因結(jié)合核因子50抗原
酵母提取物瓊脂(CM0019)木犀草苷1H-苯并咪唑-5-羧NGN3(neurogenin 3; Neurog3) 神經(jīng)元素3抗原
牛奶瓊脂 (CM0021)沒食子3-溴-5-甲氧基苯甲NGX6 (nasopharyngeal carcinoma/NPC associated gene 6) 鼻咽癌相關(guān)基因6(多肽)
巰基醋鹽培養(yǎng)基(Brewer) (CM0023)蒙花苷3-溴-5-甲氧基苯甲NIT2 (nitrilase family, member 2) NIT2蛋白抗原
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