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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:鼠源性成分(Mouse)核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P10523
產(chǎn)品分類:熒光PCR法
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點:
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時,內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基: CM0841堿性蛋白酶提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法
結(jié)核分枝桿菌生長條件: 37℃研究提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no 真空冷凍干燥法
棘孢曲霉培養(yǎng)基: CM0014模式菌株: no諾尼果提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
黃色赤桿菌產(chǎn)酶微生物/淀粉酶、脂酶(三丁甘油酯、Tween 20、Tween 40、Tween 60)模式菌株: no沉積物/含鈣質(zhì)有孔蟲粘土提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 20℃
易變鏈霉菌培養(yǎng)基: 0012模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
膠孢培養(yǎng)基: 14模式菌株: no香椿炭疽病提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25 定期移植法
-823℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
冰島硫化葉菌培養(yǎng)基: 453用于敲除PCNA1提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 80℃ 真空冷凍干燥法;定期移植法
短芽孢桿菌培養(yǎng)基: 348模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法
類鳥腸球菌生物活性微生物/抗菌活性微生物模式菌株: no生物樣/石斑魚/腸道內(nèi)容物提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 6生長條件: 25℃
白被黑蛋巢菌生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法;定期移植法;其他
人蒼白桿菌以菲、芴作為碳源生長模式菌株: no石油污染土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃
ivcas7.00111模式菌株: no安全等級: 1種屬: Lysinibacillus│sphaericus土壤提供形式: 凍干物殺蟲范圍: 庫蚊培養(yǎng)基: 0002
-824℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
熱帶假絲酵母生長條件: 25-30℃培養(yǎng)基: 13土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 真空冷凍干燥法
馬紅球菌培養(yǎng)基: 598模式菌株: no稻田土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法
4-甲氧基-2-(基) N-芐氧羰基-L-天冬4-芐酯 1,5-雙(二基膦)戊烷
4,5-二-2-溴 乙酰乙甲基丙烯乙二醇酯 1,6-雙(二基膦基)己烷
3,5-二甲氧基溴芐 磷三(基硅基)酯 六甲基二硅烷
2--6-羥基 1-基-2,2,2-三乙醇 1--1-乙烷
ETHYLENE GLYCOL MONO-TERT-BUTYL 乙二醇叔丁醚 7580-85-0
2-PROPOXYETHANOL 乙二醇丙醚 2807-30-9
Methyl isoeugenol 異丁香酚甲醚 93-16-3
2-Ethoxy 乙位 93-18-5
大鼠再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血管緊張素1-7(Ang1-7)免疫試劑盒 Human Angiotension 1-7,Ang1-7 ELISA Kit
人抗Mi2抗體(ai-Mi2-Ab)ELISA試劑盒 ,英文名: ai-Mi2-Ab ELISA Kit
RatLeptin,LEPELISA試劑盒大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humangranulocytechemotacticprotein-2,GCP-2ELISA試劑盒人粒趨化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLactoferrinaibodyIgG,LF/LTFAb-IgGELISAKit人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTFAb-Ig)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鼠源性成分(Mouse)核酸檢測試劑盒具棲冬青苷42719-32-4中文別名:長梗冬青苷; 具棲冬青甙; 長梗冬青甙
英文名:Pedunculoside
登錄號:42719-32-4
分子式:C36H58O10
分子量:650.84
分子結(jié)構(gòu):
外觀:無色針晶
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等
提取來源:冬青科冬青屬植物鐵冬青Ilex rotunda Thunb.的樹皮
熔點:206~207℃
藥理藥效:清熱解,消腫止痛。用于感冒,扁桃體炎,咽喉腫痛,急性胃腸炎,風(fēng)濕骨痛;外用治跌打損傷,癰癤瘡瘍,外傷出血,燒燙傷。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
PCR的反應(yīng)條件:
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時間太短時,會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。
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