細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：
(1)  細(xì)胞的收獲
用來(lái)凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候，這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來(lái)凍存的細(xì)胞開(kāi)始時(shí)方法和平時(shí)一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬(wàn) 細(xì)胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過(guò)度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí)，再放入 -80℃冰箱過(guò)夜(如果沒(méi)有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
(4)  儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。

操作步驟:

(1) 細(xì)胞系培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過(guò)大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時(shí)，吸除無(wú)血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長(zhǎng)滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗(yàn)證敲減/過(guò)表達(dá)效率。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CHES1蛋白抗體　英文名；CHES1微管蛋白α/Tubulin α/α-tubulin單克隆抗體　英文名；alpha Tubulin

CHIC2蛋白抗體　英文名；CHIC2微管蛋白α/Tubulin α抗體　英文名；Tubulin, Alpha 4a

CHRAC1蛋白抗體　英文名；CHRAC1微管蛋白β tubulin/Tubulin β（內(nèi)參）單克隆抗體　英文名；Beta tubulin (Loading Control)

CHX10蛋白抗體　英文名；CHX10微管蛋白β tubulin/Tubulin β（內(nèi)參）抗體　英文名；Beta tubulin (Loading Control)

CISD1蛋白抗體　英文名；CISD1微管蛋白β tubulin/Tubulin β抗體　英文名；Beta tubulin

CLEC2D蛋白抗體　英文名；CLEC2D微管蛋白β1 tubulin(內(nèi)參)單克隆抗體　英文名；beta I Tubulin (Loading Control)

CMBL蛋白抗體　英文名；CMBL微管蛋白β3（神經(jīng)標(biāo)志物）單克隆抗體　英文名；TUBB3 (Neuronal Marker)

c-Myc tag標(biāo)簽抗體　英文名；微管蛋白β3抗體　英文名；Tubb3

c-Myc應(yīng)答蛋白抗體　英文名；RCL微管蛋白β3重組兔單克隆抗體　英文名；Tubulin beta-III

CNOT6蛋白抗體　英文名；CNOT6微管蛋白β4抗體　英文名；beta IV Tubulin

COBL蛋白抗體　英文名；Cordon bleu homolog微管蛋白β5抗體　英文名；TUBB5

COG1蛋白抗體　英文名；COG1微管蛋白β輔助因子D抗體　英文名；Beta tubulin cofactor D

Coilin蛋白抗體　英文名；Coilin微管蛋白γ/Tubulin γ抗體　英文名；gamma tubulin

COL10A1重組兔單克隆抗體　英文名；COL10A1微管蛋白γ單克隆抗體　英文名；Gamma Tubulin

S180(艾氏腹水瘤細(xì)胞)COMM結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體　英文名；COMMD4微管蛋白δ1/δ Tubulin抗體　英文名；Delta 1 Tubulin

Complexin I/復(fù)合素1抗體　英文名；CPLX1微管蛋白聚合促進(jìn)蛋白24　英文名；TPPP

Complexin II/復(fù)合素2抗體　英文名；CPLX2微管蛋白抗體　英文名；beta Tubulin (Loading Control)