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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>>人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>> 48T/96TPγ人γ肽ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
IL-2R人白介素2受體ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
PCDH1人原鈣黏素ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
LTA人淋巴毒素αELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
ALDH人乙醛脫氫酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
FⅫ人凝血因子ⅫELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類(lèi)型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全:生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | Pγ人γ肽ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human Peptide γ, Pγ Elisa Kit |
貨號(hào) | FS-H63319 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)
Escherichia coli 大腸埃希氏菌(大腸桿菌)Escherichia coli凍干安全等級(jí):1模式菌株:no組氨、異亮氨、纈氨缺陷型營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 10.0 g,牛肉提取物 3.0 g,NaCl 5.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾 1.0 L,pH 7.0生長(zhǎng)條件:35-37℃,好氧 純度:≥98%
Salmonella paratyphi β 乙型副傷寒沙門(mén)氏菌Salmonella paratyphi β凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no研究;分析檢測(cè)。研究,質(zhì)量控制,2015版中國(guó)藥典質(zhì)控菌株。麥芽汁瓊脂-2:15Brix. 麥芽汁 1.0L,瓊脂 15.0。pH自然。生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:2-8℃。-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Bacillus pumilus 短芽孢桿菌Bacillus pumilus凍干管,斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無(wú)菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無(wú)菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長(zhǎng)條件:30℃,好氧存儲(chǔ)條件:2-8℃冷藏 純度:≥98%
Shigella flexneri 費(fèi)氏志賀氏菌Shigella flexneri凍干安全等級(jí):1模式菌株:no營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 10.0 g,牛肉提取物 3.0 g,NaCl 5.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾 1.0 L,pH 7.0生長(zhǎng)條件:37℃,好氧 純度:≥99%
Bradyrhizobiumjaponicum(Kirchner)Jordan 大豆根瘤菌Bradyrhizobiumjaponicum(Kirchner)Jordan凍干安全等級(jí):1模式菌株:no根瘤菌YMA培養(yǎng)基:KH2PO4 0.25 g,K2HPO4 0.25 g,MgSO4·7H2O 0.2 g,NaCl 0.1 g,酵母提取物 0.8 g,甘露醇 10.0 g,瓊脂 18.0 g,蒸餾 1.0 L,pH 7.2,121℃,15min。生長(zhǎng)條件:28-30℃,好氧,5-7天 純度:97%
INAbacria 冰核細(xì)菌INAbacria安全等級(jí):1模式菌株:no2 純度:98%
Escherichia cloacae 陰溝腸桿菌Escherichia cloacae凍干安全等級(jí):1模式菌株:no營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 10.0 g,牛肉提取物 3.0 g,NaCl 5.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾 1.0 L,pH 7.0生長(zhǎng)條件:37℃,好氧 純度:98%
Enrobacr aerogenes 產(chǎn)氣腸桿菌Enrobacr aerogenes分離基物:痰液凍干安全等級(jí):1模式菌株:。質(zhì)檢測(cè),質(zhì)量控制菌株。營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長(zhǎng)條件:37℃,好氧。 純度:98%
Pγ人γ肽ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理優(yōu)級(jí)胎牛血清 綠原1-溴-2,3,5,6-四苯JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2; Janus kinase 2; JAK-2) 蛋白質(zhì)酪氨激酶JAK-2抗原
新綠原(5-咖啡酰奎寧)1-溴-2,3,5,6-四苯phospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008) 磷化蛋白酪氨激酶JAK-2抗原
ES級(jí)別胎牛血清隱綠原(4-咖啡??鼘帲?-溴-2-JNK1/3 (c-Jun amino-terminal kinase 1/3) c-Jun氨基末端激酶1/3多肽抗原
新生牛血清異綠原A(3,5-二咖啡酰奎寧)順-二雙(三苯基膦)鉑(II), Pt minphospho-JNK1/2/3(pThr183/pTyr185) peptide 磷化氨基末端激酶1/2/3(pJNK1/2/3)抗原
異綠原B(3,4-二咖啡??鼘帲╉?二雙(三苯基膦)鉑(II), Pt minKi-67(Antigen identified by monoclonal antibody Ki 67) Ki-67 Antigen
馬血清異綠原C(4,5-二咖啡酰奎寧)烯基三苯基溴化磷Klf4 (Kruppel likefactor 4) 腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子抗原
1-咖啡??鼘幭┗交寤譸hospho-KLF5/Krueppel-like factor 5 (pSer272) 磷化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原
熱滅活馬血清洋薊素(1,3-二咖啡??鼘帲┍椒尤衔飌hospho-Klf5/CKLF/Kruppel like factor 5, Human, mo, rat, horse, bovine, rabbit, pig, dog 磷化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原
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