ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購優(yōu)勢如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
Zygosaccharomyces rouxii(Saito)Lodd 魯氏接合酵母Zygosaccharomyces rouxii(Saito)Lodd凍干安全等級:1模式菌株:no醬油酵母。YM培養(yǎng)基:酵母提取物 3.0 g，麥芽提取物 3.0 g， 葡萄糖 10.0 g， 蛋白棟 5.0 g， 瓊脂 20.0 g， 蒸餾 1000 ml， pH 6.2 +/- 0.2。121℃，15min。生長條件:25℃，好氧 純度：97%

Torulopsis│mogii 莫格球擬酵母Torulopsis│mogii分離基物:稀醪凍干物安全等級:1模式菌株:no醬油生香CM0077生長條件:25-28存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Rhodococcus erythropolis 紅平紅球菌Rhodococcus erythropolis凍干安全等級:1模式菌株:no芳烴類固醇營養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 10.0 g，牛肉提取物 3.0 g，NaCl 5.0 g，瓊脂 15.0 g，蒸餾 1.0 L，pH 7.0生長條件:30℃，好氧 純度：98%

Rhizobiumradiobacr 放射性根瘤菌Rhizobiumradiobacr安全等級:1模式菌株:no產(chǎn)生根瘤2生長條件:26℃ 純度：98%

Pseudomonas stutzeri 施氏假單胞菌Pseudomonas stutzeri分離基物:人類的腦脊髓液凍干安全等級:1模式菌株:、分類研究，減少嘧類NB生長條件:37℃,24H，陰性桿菌，菌種純。 純度：98%

Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn 枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn凍干安全等級:1模式菌株:no營養(yǎng)肉汁瓊脂： 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長條件:30℃，好氧 純度：98%

Azotobacr chroococcum Beijerinck 褐球固氮菌Azotobacr chroococcum Beijerinck凍干安全等級:1模式菌株:no用作菌肥。固氮培養(yǎng)基:KH2PO4 0.2 g,K2HPO4 0.8 g,MgSO4·7H2O 0.2 g,CaSO4·2H2O 0.1 g,FeCl3 微量 g,Na2MoO4·2H2O 微量 g,酵母提取物 0.5 g,甘露醇 20.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾 1.0 L,pH 7.2生長條件:28-30℃，好氧 純度：98%

Bacillus megarium de Bary 巨大芽孢桿菌Bacillus megarium de Bary凍干管安全等級:1模式菌株:no細(xì)菌肥料營養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾 1.0L，pH7.0，121℃，15min。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件:30℃，好氧。存儲條件:2-8℃。 純度：98%
NKB人神經(jīng)激肽BELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理人臍動脈內(nèi)皮微RNA1-乙基-3-甲基咪唑六磷鹽[用于熔鹽]IL-6 (Interleukin-6) Human  白介素6

DPBS，（10X），（IVD）人臍靜脈平滑肌微RNA1-乙基-3-甲基咪唑六磷鹽[用于熔鹽]IL-7(Interleukin-7)  白介素7抗原

PBS，（1X）人臍動脈平滑肌微RNA3-基吡唑-4-羧乙酯IL-6R Alpha (IL6R-alpha)  白介素6受體α抗原

橄欖苦苷3-基吡唑-4-羧乙酯gp130/IL-6R  白介素-6受體抗原

PBS，（10X）黨參炔苷3-基吡唑-4-羧乙酯IL-7Ra/CD127 peptide  白介素-7受體a抗原

PBS，（1X）鼠尾草N,N,N',N'-四苯基聯(lián)苯胺ING1/p33(inhibitor of growth gene 1)  生長抑制因子基因1抗原

迷迭香N,N,N',N'-四苯基聯(lián)苯胺Inhibin Alpha  抑制素α抗原

PBS，（10X）黃豆黃苷N,N,N',N'-四苯基聯(lián)苯胺Inhibin beta A peptide  抑制素beta A抗原
操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)