當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TAVP人精氨酸加壓素ELISA試劑盒實驗原理
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公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | AVP人精氨酸加壓素ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human arginine vasopressin, AVP Elisa Kit |
貨號 | FS-H63311 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Brevundimonassp. Brevundimonassp.Brevundimonassp.安全等級:1模式菌株:no108生長條件:28℃ 純度:97%
Enrobacrcloacaesubsp.cloacae 陰溝腸桿菌(陰溝腸桿菌陰溝亞種)Enrobacrcloacaesubsp.cloacae安全等級:1模式菌株:no2生長條件:37℃ 純度:98%
Klebsiella oxytoca 產(chǎn)克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca分離基物:鹵制品凍干物安全等級:1模式菌株:no研究、質(zhì)量控制營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件:37℃,好氧存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Bacillus subtilis subsp. subtilis 枯草芽孢桿菌枯草亞種Bacillus subtilis subsp. subtilis凍干物安全等級:1模式菌株:no發(fā)酵產(chǎn)納豆激酶。營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基:蛋白胨 5.0g,3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。121℃,15min。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件:35-38℃,好氧存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:>98.0%(HPLC)
Bacillus│lentus 遲緩芽孢桿菌Bacillus│lentus分離基物:土壤凍干物安全等級:1CM0002生長條件:30℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:>98.0%(HPLC)
Pseudomonas putida 惡臭假單胞菌Pseudomonas putida分離基物:臨床分離百特醫(yī)療用品公司凍干管安全等級:1模式菌株:no質(zhì)量控制菌株營養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件:30℃,好氧。存儲條件:2-8℃ 純度:97%
Alcaligenes│xylosoxidans subsp. xylosoxidans 木糖氧化產(chǎn)菌木糖氧化亞種Alcaligenes│xylosoxidans subsp. xylosoxidans凍干物安全等級:2研究、質(zhì)量控制CM0002生長條件:37℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Aeromonas hydrophila 嗜氣單胞菌Aeromonas hydrophila凍干物安全等級:2模式菌株:no質(zhì)量控制。Microscan產(chǎn)品質(zhì)量控制菌株。營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。121℃,15min。生長條件:30℃,好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:≥97%
AVP人精氨酸加壓素ELISA試劑盒實驗原理瓊脂(條)人膀胱基質(zhì)成纖維微RNA4-苯基異酯HPV16-E7/E7 protein(Human papillomavirus type 16) 人類狀瘤病16抗原
50010人前列腺上皮微RNA(R)-(+)-環(huán)氧烷Hpt/HP(haptoglobin) 結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗原
50020人前列腺成纖維微RNA(R)-(+)-環(huán)氧烷H-ras/Ras/Ras p21 peptide 原癌基因H-ras抗原
50023人前列腺平滑肌微RNA4-二甲氧基(易)HSTF2/HSF2 peptide 熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗原
28981人顱骨造骨微RNA4-二甲氧基(易)BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein) 癌耐藥相關(guān)蛋白(抗原)
28982人滑膜微RNA1,5-Anhydro-D-Sorbitol CrystallineHrasls3/HREV107(HRAS like suppressor 3) HRAS樣抑制因子3抗原
028982A人髓核微RNA1-(三乙酰)咪唑HSP47(Heat shock protein-47) 熱休克蛋白-47抗原
50100人肝竇內(nèi)皮微RNA1-(三乙酰)咪唑HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha ) 熱休克蛋白90α抗體
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