細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：雞淋巴瘤細(xì)胞    

產(chǎn)品英文：DT40

貨號(hào)：FS-01X9752

細(xì)胞培養(yǎng)條件：DMEM +10%FBS+5%雞血清+0.05mMβ－巰基乙醇+1%P/S

生長(zhǎng)狀態(tài)：懸浮生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫   

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

人抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒英文名稱：Human platelet antibodies IgG/M/A,PA-IgG/M/A ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗淋巴細(xì)胞球蛋白(ALG)ELISA試劑盒 英文名稱：Human anti-lymphocyte globulin,ALG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗胰蛋白(AT)ELISA試劑盒英文名稱：Human Anti-trypsin,AT ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA試劑盒英文名稱：Human anti-ribosomal P protein antibody,ARPA/Rib-P ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗骨骼肌抗體(ASA)ELISA試劑盒英文名稱：Human Anti-Somatic Muscle Antibody,ASA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人甲狀腺抗體(TAb)ELISA試劑盒英文名稱：Human Thyroid Antibody,TAb ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISA試劑盒英文名稱：Human islet cell antibody,ICA ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)ELISA試劑盒英文名稱：Human salivary duct autoantibody,SDA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗紡錘體抗體(MSA)ELISA試劑盒英文名稱：Human mitotic spindle apparatus antibody,MSA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗角蛋白抗體(AKA)ELISA試劑盒英文名稱：Human Anti-keratin antibody,AKA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒英文名稱：Human Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody,pANCA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)ELISA試劑盒英文名稱：human anti-neutrophil cytoplasmic antibody,cANCA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗凝血抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒英文名稱：Human anti-prothrombins antibodies,aPT1/aPT2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA試劑盒英文名稱：human phosphatidylinositol antibody IgG/IgM,PI Ab-IgG/IgM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA試劑盒英文名稱：Human β2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M,β2-GP1 IgA/G/M ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人組織蛋白抗體(Cath Ab)ELISA試劑盒英文名稱：Human Cathepsin Antibodies,Cath Ab ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTF Ab-Ig)ELISA試劑盒英文名稱：Human Lactoferrin antibody IgG,LF/LTF Ab-IgG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗殺菌通透性增高蛋白抗體(BPI-Ab)ELISA試劑盒英文名稱：Human anti-Bactericidal permeability increasing protein antibody,BPI-Ab ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
雞淋巴瘤細(xì)胞APEX2  嘧啶核內(nèi)切2抗體規(guī)格: 0.1ml

ADAMTS10  整合樣金屬蛋白與10型抗體規(guī)格: 0.1ml

BCAT2/BCAM  支鏈基轉(zhuǎn)2抗體規(guī)格: 0.1ml

Bcl2A1  BCL2相關(guān)蛋白A1抗體規(guī)格: 0.1ml

Bcl3  B細(xì)胞淋巴瘤蛋白3抗體規(guī)格: 0.1ml

HSD17B6  17-β-羥脫氫6抗體規(guī)格: 0.1ml

TFF1/BCEI  乳腺癌雌誘導(dǎo)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Galectin 1  半乳糖凝集1抗體規(guī)格: 0.1ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。