細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：腎上腺髓質細胞    

產品規(guī)格：5×105

貨號：FS-01X9836

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

大鼠糖皮質類固受體(GR)ELISA試劑盒英文名稱：Rat glucocorticoid receptor,GR ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠黃體生成釋放(LHRH)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Luteinizing Hormone-Releasing Hormone,LHRH ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠8異前列腺(8-iso-PG)ELISA試劑盒英文名稱：Rat 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠γ干擾誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒英文名稱：Rat interferon-inducible protein 16,IFI16/p16 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠基質細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Stromal cell derived factor 1a,SDF-1a ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠髓過氧化物(MPO)ELISA試劑盒英文名稱：Rat myeloperoxidase,MPO ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠顆粒B(Gzms-B)ELISA試劑盒英文名稱：Rat granzymes B,Gzms-B ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠顆粒A(Gzms-A)ELISA試劑盒英文名稱：Rat granzymes A,Gzms-A ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠淋巴細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒英文名稱：Rat lymphotactin,Lptn/LTN ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA試劑盒英文名稱：Rat terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠補體蛋白4(C4)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Complement 4,C4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠腎(Renin)ELISA試劑盒 英文名稱：Rat Renin ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠膜聯蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒英文名稱：Rat annexin Ⅴ,ANX-Ⅴ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠抗內皮細胞抗體(AECA)ELISA試劑盒英文名稱：Rat anti-endothelial cell antibody,AECA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠全段甲狀旁腺(i-PTH)ELISA試劑盒英文名稱：Rat intact Parathormone ,i-PTH ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

大鼠牛小腸堿性磷(CIAP)ELISA試劑盒英文名稱：Rat Calf Intestine Alkaline Phosphatase,CIAP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒英文名稱：associated protein A,SP-A ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
腎上腺髓質細胞PARL  骨骼肌細胞線粒體膜蛋白PARL抗體規(guī)格: 0.2ml

GYPB/CD235b  血型糖蛋白δ抗體規(guī)格: 0.2ml

FUT1  巖藻糖轉移1抗體規(guī)格: 0.2ml

ICAM4/CD242  細胞間粘附分子4抗體規(guī)格: 0.2ml

RHCG  RH血型C糖蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

SLC14A1/RACH1  尿轉運型糖蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

XKR1  膜轉運蛋白XK抗體規(guī)格: 0.2ml

ACSM3  丁?；o合成3抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。