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產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
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適用領(lǐng)域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9653 |
產(chǎn)品屬于:
產(chǎn)品名稱:小鼠神經(jīng)干細胞
產(chǎn)品英文:C17.2
貨號:FS-01X9653
細胞培養(yǎng)條件:DMEM+10%FBS +1%P/S
生長狀態(tài):貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定:不提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度(℃)37
運輸溫度(℃):常溫
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。 4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒Human Bone morphogenetic protein 2,BMP-2 ELISA Kit
人(cAMP)ELISA試劑盒Human cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit
人乳酸脫氫酶(LDH)ELISA試劑盒 Human Lactate Dehydrogenase,LDH ELISA Kit
人(AP)ELISA試劑盒Human Aprotinin,AP ELISA Kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)ELISA試劑盒Human matrix metalloproteinase 11,MMP11 ELISA Kit
人磷酯酶C(PLC)ELISA試劑盒 Human Phospholipase C,PLC ELISA Kit
人蛋白酶(PRSS)ELISA試劑盒 Human serine protease,PRSS ELISA Kit
人(UK)ELISA試劑盒 Human urokinase,UK ELISA Kit
人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒 Human Elastase ELISA Kit
人白細胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒 Human leukocyte exastase,HLE ELISA Kit
人α(AMS/AMY)ELISA試劑盒 Human α-Amylase,AMS/AMY ELISA Kit
人堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒 Human alkaline phosphatase,ALP ELISA Kit
人膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒Human Collagenase Type II ELISA Kit
人乙酰酯酶(AChE)ELISA試劑盒 Human Acetylcholinesterase,AChE ELISA Kit
人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA試劑盒 Human glucose oxidase,GOD ELISA Kit
人透明質(zhì)酸酶(HAase)ELISA試劑盒 Human Hyaluronidase,HAase ELISA Kit
人酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒 Human Acid Phosphatase,ACP ELISA Kit
人β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)ELISA試劑盒 Human β-glucuronidase,βGD ELISA Kit
人β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA試劑盒 Human β-glucosidase ELISA Kit
小鼠神經(jīng)干細胞ABP/SHBG 雄激素結(jié)合蛋白抗體 0.1ml
ACADM/MCAD ?;摎涿钢墟溈贵w 0.2ml
ACADL ?;o脫氫酶長鏈抗體 0.1ml
ACADVL 酰基A脫氫酶很長鏈抗體 0.2ml
ACAT1 ?;D(zhuǎn)移酶1抗體 0.2ml
SOAT2/ACAT2 膽?;D(zhuǎn)移酶2抗體 0.2ml
Aconitase 2/ACO2 鐵調(diào)節(jié)蛋白2抗體 0.2ml
ACOX1 過氧化物酶酰基A氧化酶1抗體 0.2ml
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