當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TEK人表皮角蛋白ELISA試劑盒實驗原理
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | EK人表皮角蛋白ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human epidermal keratin, EK Elisa Kit |
貨號 | FS-H63352 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
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樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
CandidarobustaDiddensetLodder 粗壯假絲酵母CandidarobustaDiddensetLodder安全等級:1模式菌株:no13生長條件:25-28℃ 純度:97%
Candida pseudotropicalis (Carlanii) Basgal 擬熱帶假絲酵母Candida pseudotropicalis (Carlanii) Basgal凍干管安全等級:1模式菌株:no飼料。5 °Bé麥芽汁瓊脂:5°Bé麥芽汁 1.0L,瓊脂 15.0g,自然pH。生長條件:25-28℃,好氧。生長特性發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、半乳糖、海藻糖;不同化阿拉伯糖、蜜二糖、乳糖、甘油。存儲條件:2-8℃。 純度:≥96% (HPLC)
Candidamacedoniensis(CaslanietChalmers)Berkhout 馬其頓假絲酵母Candidamacedoniensis(CaslanietChalmers)Berkhout安全等級:1模式菌株:no13生長條件:25-28℃ 純度:97%
Candida│lambica 郎比可假絲酵母Candida│lambica凍干物安全等級:1模式菌株:no高溫產(chǎn)脂酵母CM0077生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:98%
Candida│krusei 克魯斯假絲酵母Candida│krusei斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no淀原料發(fā)酵甘油。CM0375生長條件:28-30℃存儲條件:定期移植法 純度:98%
Streptomycesviridis(Lombardo-Pellegrino)Waksman 綠色鏈霉菌Streptomycesviridis(Lombardo-Pellegrino)Waksman安全等級:1模式菌株:no12生長條件:28℃ 純度:98%
EmericellopsisrricolavanBeyma 地生翅孢殼EmericellopsisrricolavanBeyma安全等級:1模式菌株:no產(chǎn)抗生素14,17生長條件:25-28℃ 純度:98%
Emericellopsis│mirabilis 奇異翅孢殼Emericellopsis│mirabilis凍干物安全等級:1模式菌株:no產(chǎn)抗生素。CM0014生長條件:25-28℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
EK人表皮角蛋白ELISA試劑盒實驗原理ABCG4 ABC膜轉(zhuǎn)運蛋白抗體利血平2,6-二苯TM(Thrombomodulin) 血栓調(diào)節(jié)蛋白多肽
c-Abl 非受體酪氨激酶c-Abl抗體白楊素2,6-二苯Tn-C(Tenascin-C)C-Terminus 腱糖蛋白-C(固生蛋白)C端抗原
phospho-c-Abl(Tyr412) 磷化非受體酪氨激酶c-Abl抗體白楊素-6-C-葡萄糖基-8-C-阿拉伯糖甙2,6-二苯TNF-alpha 腫瘤壞死因子-α抗原
phospho-c-Abl(Tyr245) 磷化非受體酪氨激酶c-Abl抗體喜樹2-乙基磺酰TNF- Beta(Tumor Necrosis Factor- Beta) 腫瘤壞死因子-β抗原
phospho-c-Abl(Tyr204) 磷化非受體酪氨激酶c-Abl抗體續(xù)隨二萜2-乙基磺酰TNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1) 腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗原
phospho-c-Abl(Thr735) 磷化非受體酪氨激酶c-Abl抗體千金子二萜2-乙基磺酰Acetylated-P53(Lys382) peptide 抗腫瘤P53抗原
phospho-c-Abl(Tyr89) 磷化非受體酪氨激酶c-Abl抗體龍腦3,5-二叔丁基苯甲TP I (topoisomerase I ) 拓普西異構(gòu)酶Ⅰ抗原
ABL2 ABL2蛋白抗體5-羥甲基糠3,5-二叔丁基苯甲TOPO II Alpha/DNA TP II Alpha (DNA topoisomerase II Alpha) DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅱ抗原
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