當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TP27人P27蛋白ELISA試劑盒實驗原理
公司“質量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等
產品名稱 | P27人P27蛋白ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human P27 protein Elisa Kit |
貨號 | FS-H63335 |
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結果,可提供免費技術咨詢服務!
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樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準
Schwariomyces│occidentalis 許旺酵母變種Schwariomyces│occidentalis凍干物安全等級:1模式菌株:no糖化淀CM0077生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:98%
Kluyveromyces marxianus 馬克斯克魯維酵母Kluyveromyces marxianus分離基物:牛奶斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no奶酒飲料。麥芽汁,YM 麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基::麥芽膏130g,瓊脂15g,霉素0.1g,蒸餾1L,pH6.0±0.2,121℃,15min。生長條件:28,2-3天,鏡檢為陽性卵球菌,純存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:99%
Ciromyces│matrinsis 固囊酵母Ciromyces│matrinsis分離基物:大麥曲凍干物安全等級:1模式菌株:noCM0077生長條件:28℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:96%
Endomyces│fibuligera 扣囊內孢霉Endomyces│fibuligera凍干物安全等級:1模式菌株:no產葡萄糖淀酶CM0077生長條件:24℃存儲條件:真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:96%
Zygosaccharomyces│rouxii 魯氏結合酵母Zygosaccharomyces│rouxii凍干物安全等級:1模式菌株:no醬油酵母CM0077生長條件:28℃存儲條件:真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:97%
Trichosporon capitatum Diddens et Lodder 頭狀絲孢酵母Trichosporon capitatum Diddens et Lodder凍干安全等級:1模式菌株:no產脂肪酶YM 培養(yǎng)基::酵母提取物,3.0 g 麥芽提取物,3.0 g 葡萄糖,10.0 g 蛋白棟,5.0 g 瓊脂,20.0 g 蒸餾1000 ml ,pH 6.2 +/- 0.2生長條件:25-28℃,好氧 純度:99%
Streptococcus lactis (Lisr) Lohnis 乳鏈球菌Streptococcus lactis (Lisr) Lohnis凍干安全等級:1模式菌株:no用于制奶MRS培養(yǎng)基::酪胨 10.0g,牛肉 8.0g,酵母 4.0 g,葡萄糖 20.0 g,鎂 0.2 g,鈉 5.0 g,檸檬三銨 2.0 g,磷氫二鉀 2.0 g,錳 0.05 g,吐溫80 1.0 g,蒸餾 1000mL。pH6.2±0.2。121℃,15min。生長條件:37℃,厭氧 純度:99%
Marivitacryptomonadis MarivitacryptomonadisMarivitacryptomonadis分離基物:海洋浮游生物安全等級:1模式菌株:102生長條件:30℃ 純度:99%
P27人P27蛋白ELISA試劑盒實驗原理加強梭狀芽孢桿菌培養(yǎng)基 (RCM) (semi-solid) (CM0149)胡黃連苷-Ⅰ5-溴-2-羥基-3-硝基吡PALB2(partner and locaizer of BRCA2) 癌易感基因相關蛋白2
加強梭狀芽孢桿菌瓊脂 (CM0151)胡黃連苷-Ⅱ5-溴-2-羥基-3-硝基吡PAFR/PTAFR 血板活化因子受體抗原
Simmons 檸檬鹽瓊脂 (CM0155)胡黃連苷-Ⅲ2,5-二溴-3-硝基吡Phospho-PAK4 (Ser99) peptide 磷化p21激活激酶4多肽抗原
毛滴蟲培養(yǎng)基基礎 (CM0161)(+)-兒茶素2,5-二溴-3-硝基吡PAK7/PAK5/MBT 激活激酶PAK7/PAK5抗原
脫氧膽鹽瓊脂 (CM0163)表沒食子兒茶素沒食子酯2,5-二溴-3-硝基吡PAR-1 (Protease-activated receptors-1) 蛋白酶激活受體-1抗原
布魯氏培養(yǎng)基基礎 (CM0169)表兒茶素沒食子酯(S)--2-羧PAR-2 (Protease-activated receptors-2) 蛋白酶激活受體-2抗原
液體巰基醋鹽培養(yǎng)基 (USP) (CM0173)表沒食子兒茶素(EGC)(S)--2-羧PAR4 (protease-activated receptor 4) 蛋白酶活化受體4/前列腺凋亡反應蛋白4抗原
Todd-Hewitt 肉湯 (CM0189)沒食子兒茶素沒食子酯(GCG)(S)--2-羧PARP(poly ADP-ribose polymerase)N-Terminus 多腺苷二磷多聚酶抗原(N端)
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