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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> PDH丙酮酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒可見分光光度法
貨號(hào) | FS-01S63464 |
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商品介紹:
測(cè)定意義 PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來(lái)。 測(cè)定原理 PDH催化丙酮酸脫氫,同時(shí)還原WST-8產(chǎn)生黃色物質(zhì),從而導(dǎo)致450nm光吸收的增加。 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒,質(zhì)量信得過(guò)產(chǎn)品,售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位,竭誠(chéng)為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。
產(chǎn)品名稱:PDH丙酮酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒可見分光光度法
規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:可見分光光度法
貨號(hào):FS-01S63464
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。 1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。 3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。 5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。 8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。 |
粗酶液提取:
1、細(xì)胞或組織樣品的制備: 培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。 |
上皮粘附分子(EPCAM)檢測(cè)試劑盒根瘤Guinea pig F-Box Protein 2(FBXO2) ELISA Kit
乙酰A羧化α(ACACα)檢測(cè)試劑盒球孢白僵Guinea pig BK (Bradykinin) ELISA Kit
纖維蛋白肽B(FPB)檢測(cè)試劑盒梭Guinea pig PLAA (Phospholipase A2 Activating Protein) ELISA Kit
含血管性血友病因子A域蛋白2(vWA2)檢測(cè)試劑盒大麥類芽胞桿Guinea pig AQP-2 (Aquaporin 2) ELISA Kit
腺苷脫(ADA)檢測(cè)試劑盒球孢白僵Guinea pig β Manase ELISA Kit
肌動(dòng)蛋白γ1(ACTγ1)檢測(cè)試劑盒大蓋小皮傘Guinea pig MCAM (Melanoma Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit
轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)檢測(cè)試劑盒水生黃桿Guinea pig MART/Melan-A (Melanoma Marker A) ELISA Kit
轉(zhuǎn)錄激活因子6(ATF6)檢測(cè)試劑盒黏瓊脂芽孢桿Guinea pig C9 (Complement Component 9) ELISA Kit
血栓A2(TXA2)檢測(cè)試劑盒環(huán)狀芽胞桿Guinea pig ITLN1 (Intelectin 1/Omentin) ELISA Kit
血小板激活因子乙酰水解Ⅰb3(PAFAH1B3)檢測(cè)試劑盒水生拉恩氏Guinea pig UCP-2 (Uncoupling Protein 2, Mitochondrial) ELISA Kit
轉(zhuǎn)錄激活因子7(ATF7)檢測(cè)試劑盒釀酒酵母Guinea pig SOCS3 (Suppressors of Cytokine Signaling 3) ELISA Kit
絲蛋白12(PRSS12)檢測(cè)試劑盒詹氏桿Guinea pig SEMA3A (Semaphorin 3A) ELISA Kit
原鈣黏β2(PCDHβ2)檢測(cè)試劑盒溜曲霉Guinea pig FSH (Follicle-Stimulating Hormone) ELISA Kit
腺苷環(huán)化2(ADCY2)檢測(cè)試劑盒米根霉Guinea pig TGF-α (Transforming Growth Factor α) ELISA Kit
脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)檢測(cè)試劑盒茸毛褐褶Guinea pig ACTg1 (Actin Gamma 1) ELISA Kit
PDH丙酮酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒可見分光光度法烯酰 Standard for GC,≥99.8% (GC)蔗糖 超純級(jí) 純度≥99.9%;RNase,DNase FreeAnti-L-enk/FITC 熒光標(biāo)記抗亮腦啡肽抗體IgG
烯酰 超純級(jí),99.9%蔗糖 ARAnti- Beta-lactoglobulin/FITC 熒光標(biāo)記牛β-乳球蛋白抗體IgG
金O 80%,用于生物染色蔗糖 CPAnti- Beta-lactoglobulin/FITC 熒光標(biāo)記牛β-乳球蛋白抗體IgG
金O 90%,用于生物染色蔗糖 ACSAnti- Beta-lactoglobulin/FITC 熒光標(biāo)記牛β-乳球蛋白抗體IgG
2,2′-聯(lián)-雙(3-乙基并噻唑啉-6-磺)二鹽 98%蔗糖 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-Laminin alpha5/FITC 熒光標(biāo)記層粘蛋白α5抗體IgG
腺苷-5′-三磷二鈉鹽,三水 98%蔗糖 用于分子生物學(xué), ≥99.5% (HPLC)Anti-LAG-3/CD223/FITC 熒光標(biāo)記活化基因-3抗體IgG
放線菌D 98%(劇品)蔗糖 用于或昆蟲培養(yǎng), ≥99.5% (GC)Anti-lamin A/FITC 熒光標(biāo)記核纖層蛋白A抗體IgG
牛血清白蛋白 96%蔗糖 用于植物培養(yǎng)Anti-Laminin Beta1/FITC 熒光標(biāo)記層粘連蛋白β1抗體IgG
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