細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號(hào)：FS-01X9774

產(chǎn)品類型：原代細(xì)胞

單位：T25/瓶

提供細(xì)胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

人腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒英文名稱：Human adrenal cortex antibody,ACA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人抗腎小球基底膜抗體(GBM)ELISA試劑盒英文名稱：Human glomerular basement membrane antibogy,GBM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒英文名稱：human β2-microglobulin,BMG/β2-MG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Annexin Ⅴ,ANX-Ⅴ ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人抗腎小管基底膜抗體(TBM)ELISA試劑盒英文名稱：Human tubular basement membrane antibogy,TBM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人apelin 13(AP13)ELISA試劑盒 英文名稱：Human apelin 13,AP13 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人Apelin 36(AP36)ELISA試劑盒英文名稱：Human Apelin 36,AP12 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血管緊張Ⅱ受體Ⅰa型(AgtrⅠa)ELISA試劑盒英文名稱：human angiotensin Ⅱ receptor type Ⅰa,AgtrⅠa ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)ELISA試劑盒英文名稱：Human angiopoietin-like protein 3,ANGPTL3 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人α肌動(dòng)蛋白(α Actin)ELISA試劑盒英文名稱：Human Alpha-Actin,α Actin ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人心肌錨蛋白重復(fù)域1(ANKRD1)ELISA試劑盒英文名稱：Human cardiac ankyrin repeat domain 1,ANKRD1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人瘦受體(LEPR)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Leptin Receptor,LEPR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)ELISA試劑盒英文名稱：Human Angiotensin Ⅱ Receptor 2,AT2R ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人血管緊張Ⅱ受體1(ANGⅡR-1)ELISA試劑盒英文名稱：Human angiotension Ⅱ receptor 1,ANGⅡR-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血管生成4(ANG-4)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Angiopoietin 4,ANG-4 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ELISA試劑盒英文名稱：Human soluble myosin heavy chain 1,sMHC-1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人熱休克因子1(HSF-1)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血管活性抑制劑(VPI)ELISA試劑盒 英文名稱：Human vasopeptidase inhibitors,VPI ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞PDC6I/Alix  調(diào)亡誘導(dǎo)因子6相互作用蛋白/多巴受體相互作用蛋白4抗體規(guī)格: 0.2ml

PEF1  調(diào)亡誘導(dǎo)因子家族蛋白PEF1抗體規(guī)格: 0.2ml

PHAPI2/APRIL  性核磷蛋白32家族B抗體規(guī)格: 0.2ml

DRAK1/STK17A  /蛋白激17A抗體（DAP凋亡誘導(dǎo)蛋白激1）規(guī)格: 0.2ml

ERN2  內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml

A1BG  α1B糖蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

A1CF/Apo B RNA editing protein  載脂蛋白B-mRNA編碼蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

FASTKD1  Fas活化激結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。