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人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;TE671 Subline No.2
貨號(hào) | AXB10210 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
產(chǎn)品名稱 | 人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞;HULEC-5a | 貨號(hào) | AXB10210 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | HULEC-5a:HULEC5a |
分類 | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
商品介紹:
別稱 | HULEC-5a |
年齡(性別) | 新生 |
組織來源 | 肺 |
生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
生物安全等級(jí) | 2 |
生長培養(yǎng)基 | MCDB131+10ng/ml EGF+1μg/ml Hydrocortisone+10mM L-glutamine+10% FBS+1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | |
凍存液 | 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO |
溫度 | 液氮 |
培養(yǎng)條件 | |
氣相 | 空氣,95%;CO2,5% |
溫度 | 37℃ |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-3244 |
產(chǎn)品公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動(dòng)物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):
(1) 細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候,這時(shí)細(xì)胞生長狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時(shí)方法和平時(shí)一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說,每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí),再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
公司正在出售的產(chǎn)品:
mouse IgM ELISA kit 小鼠免疫球蛋白IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CX45/FITC 熒光素標(biāo)記間隙連接蛋白45抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DcR3/TR6 誘捕受體3抗體 規(guī)格 0.1ml
Chicken IgG/APC 熒光素APC標(biāo)記雞IgG 0.1ml
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多克隆抗體 兔多抗 0.1
Anti-CX45/FITC 熒光素標(biāo)記間隙連接蛋白45抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
mouse IgA ELISA kit 小鼠免疫球蛋白IgAMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CXCL4/PF-4/FITC 熒光素標(biāo)記血小板因子4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DcR2/CD264/TNFRSF10D 誘捕受體2抗體 規(guī)格 0.1ml
Bovine IgM/APC 熒光素APC標(biāo)記IgM 0.1ml
Leptin receptor 英文名稱: 瘦素受體抗體 0.1ml
HRP標(biāo)記單克隆抗體 小鼠單抗 0.3
Anti-CXCL4/PF-4/FITC 熒光素標(biāo)記血小板因子4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SCT(Salmon calcitonin) ELISA Kit Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-DAPK3/FITC 熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白激酶3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CYP4A1 細(xì)胞色素P450 4A1抗體 規(guī)格 0.2ml
Rabbit IgG/Cy5.5 熒光素Cy5.5標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對照) 0.1ml
Leptin receptor 英文名稱: 瘦素受體抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh YY1AP1/HCCA2 肝癌相關(guān)蛋白2抗體(轉(zhuǎn)錄因子YY1結(jié)合蛋白1抗體) 規(guī)格 0.2ml
Anti-DAPK3/FITC 熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白激酶3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
sRANKL(Mouse soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand)ELISA Kit 小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Collagen VII /FITC 熒光素標(biāo)記抗Ⅶ膠原抗體(Ⅶ型膠原)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh DFF-40beta/CAD/CPAN Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-FITC 兔抗熒光素 0.1ml
Leptin receptor 英文名稱: 瘦素受體抗體 0.1ml
檢測試劑盒 96孔/盒 動(dòng)物組織/水產(chǎn)/蜂蜜
Anti-Collagen VII /FITC 熒光素標(biāo)記抗Ⅶ膠原抗體(Ⅶ型膠原)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Methylase(Mouse Methylase)ELISA Kit 小鼠甲基化酶Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞;HULEC-5aAnti-COX7A2/FITC 熒光素標(biāo)記氧化酶COX7A2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Desmocollin 4 橋粒糖蛋白4抗體 規(guī)格 0.2ml
Bovine IgG (親和化) IgG 10mg
LEPREL2 英文名稱: 皮屑樣蛋白2抗體 0.2ml
唑酮代謝物檢測試劑盒 96孔/盒 各種動(dòng)物組織/水產(chǎn)/蜂蜜
Anti-COX7A2/FITC 熒光素標(biāo)記氧化酶COX7A2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時(shí),吸除無血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長滿之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗(yàn)證敲減/過表達(dá)效率。
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