產(chǎn)品屬性：

商品介紹：

測(cè)定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。

測(cè)定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測(cè)吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

注意事項(xiàng)：

①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用

樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無(wú)色中性液體樣品，體積可達(dá)2.000ml。

2）. 過(guò)濾混濁溶液。

3）. 除去樣品中的CO 2 （果糖含量測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)過(guò)過(guò)濾）。

4 ）. 果糖含量測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)過(guò)加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）. 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

乙醇脫氫酶（ADH）測(cè)試盒    微量法    乙醇脫氫酶測(cè)試盒100管/96樣

乙醇脫氫酶（ADH）測(cè)試盒    紫外分光光度法    乙醇脫氫酶測(cè)試盒50管/48樣

單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測(cè)試盒    微量法    單脫氫抗壞血酸還原酶測(cè)試盒100管/96樣

單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測(cè)試盒    紫外分光光度法    單脫氫抗壞血酸還原酶測(cè)試盒50管/48樣

甲醛脫氫酶（FDH）測(cè)試盒    微量法    甲醛脫氫酶測(cè)試盒100管/96樣

甲醛脫氫酶（FDH）測(cè)試盒    紫外分光光度法    甲醛脫氫酶測(cè)試盒50管/48樣

乙醛脫氫酶（ALDH）測(cè)試盒    微量法    乙醛脫氫酶測(cè)試盒100管/96樣

乙醛脫氫酶（ALDH）測(cè)試盒    紫外分光光度法    乙醛脫氫酶測(cè)試盒50管/48樣

輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒    微量法    輔酶ⅡNADP測(cè)試盒100管/48樣

輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒    可見(jiàn)分光光度法    輔酶ⅡNADP測(cè)試盒50管/24樣

NADP磷酸酶（NADPase）測(cè)試盒    微量法    NADP磷酸酶測(cè)試盒100管/96樣

NADP磷酸酶（NADPase）測(cè)試盒    可見(jiàn)分光光度法    NADP磷酸酶測(cè)試盒50管/48樣

6磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖6磷酸脫氫酶測(cè)試盒    微量法    6磷酸葡萄糖脫氫酶測(cè)試盒100管/96樣

6磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖6磷酸脫氫酶測(cè)試盒    紫外分光光度法    6磷酸葡萄糖脫氫酶測(cè)試盒50管/48樣

胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測(cè)試盒    微量法    胞漿異檸檬酸脫氫酶測(cè)試盒100管/96樣

胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測(cè)試盒    紫外分光光度法    胞漿異檸檬酸脫氫酶測(cè)試盒50管/48樣

NADP蘋果酸酶（NADPME）測(cè)試盒    微量法    NADP蘋果酸酶測(cè)試盒100管/96樣

NADP蘋果酸酶（NADPME）測(cè)試盒    紫外分光光度法    NADP蘋果酸酶測(cè)試盒50管/48樣

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs）

人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪

人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝

人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞

小鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

小鼠皮層神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

人腦血管平滑肌細(xì)胞

人海馬神經(jīng)元

人少突膠質(zhì)細(xì)胞

人星形膠質(zhì)細(xì)胞

小鼠成纖維細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞

MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元

輔酶ⅠNAD測(cè)試盒50管/24樣MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元

MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞

操作流程：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3. 樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。