使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）     轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

公司產(chǎn)品具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

產(chǎn)品名稱：OTTOⅠ解離液說明書

貨號：BJ-01R3424

規(guī)格：100ml

分類：細(xì)胞組分分離

儲(chǔ)存條件：4℃,12個(gè)月

用途：分離植物組織細(xì)胞核

注意事項(xiàng)：主要由檸檬酸、吐溫等組成。

注意事項(xiàng)：

1、盡注意無菌操作，避免污染。

2、避免反復(fù)凍融。

3、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：

1.直接配制法    對于純凈的物質(zhì)(稱做基準(zhǔn)物質(zhì))可準(zhǔn)確進(jìn)行稱量，用蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到一定容積的容量瓶中稀釋至標(biāo)線，溶液的準(zhǔn)確濃度可以直接計(jì)算出來。溶質(zhì)的純度、性質(zhì)等對濃度有較大影響，為此，對用來直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液用的基準(zhǔn)物質(zhì)必須具備以下條件：

(1)物質(zhì)的純度要高，含量不得低于99.9％，雜質(zhì)的含量應(yīng)當(dāng)少到可以忽略的程度。

(2)物質(zhì)的分子組成應(yīng)與其化學(xué)式*符合，包括結(jié)水合物中的結(jié)品水含量也必須與其化學(xué)式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質(zhì)穩(wěn)定，貯蔵時(shí)應(yīng)不發(fā)生變化，不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分，不易風(fēng)化潮解和被空氣氧化，烘干時(shí)不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準(zhǔn)物質(zhì)以減小稱量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準(zhǔn)物質(zhì)條件的物質(zhì)，可先配制成近似所需濃度的溶液，再用基準(zhǔn)物質(zhì)溶液或能與其發(fā)生定量反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，求其準(zhǔn)確濃度，這種通過滴定來確定準(zhǔn)確濃度的操作叫做“標(biāo)定"。間接法配制近似濃度溶液時(shí)不需用分析天平稱量和容量瓶配制，可用臺(tái)秤、量筒等器皿。將稱好的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到干凈的試劑瓶中，先加少量蒸餾水將其溶解，繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準(zhǔn)物的條件，故間接法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質(zhì)；濃鹽酸因易揮發(fā)而無法準(zhǔn)確稱量；不易得到分析純級的試劑等，這些物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液須用間接法來配制，經(jīng)標(biāo)定后再做標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：

1.用基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定法

(1)多次稱量法    用減重法精密稱取幾份(如2～3份)基準(zhǔn)物質(zhì)，分別倒入編號的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi)，各加少量蒸餾水溶解，再加指示劑后分別用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，各自記錄所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度，最后取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱取一份基準(zhǔn)物質(zhì)，在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解，順玻棒全部轉(zhuǎn)移到已校正好的容量瓶中，多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定體積的溶液，混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加指示劑后用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，每次做好記錄，根據(jù)所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量，分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

2.比較法標(biāo)定    如果待標(biāo)定溶液能與某標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行反應(yīng)，可吸量一定體積的某標(biāo)準(zhǔn)溶液，用待標(biāo)定溶液滴定，或吸量一定體積的待標(biāo)定溶液，用某標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，按N1V1＝N2V2式可以計(jì)算出待標(biāo)定溶液的準(zhǔn)確濃度。這種用標(biāo)準(zhǔn)落液來測定待標(biāo)定溶液準(zhǔn)確濃度的過程稱為“比較法"標(biāo)定。如果某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度由于某些原因不夠準(zhǔn)確時(shí)，就會(huì)直接影響待標(biāo)定溶液濃度的準(zhǔn)確性，顯然比較法不如用基準(zhǔn)物質(zhì)直接標(biāo)定的方法精確，但比較法簡便易行。

標(biāo)定完畢，蓋緊標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶塞，瓶簽上注明標(biāo)準(zhǔn)溶液名稱、準(zhǔn)確濃度和日期等。

Radix trichosanthis天花粉LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周METTL11A  甲基化樣蛋白11抗體（N端） 規(guī)格: 0.1mlDuck salmonella  鴨沙門氏菌抗體 0.2ml

火雞源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-chicken IgM/Cy7  Cy7標(biāo)記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1mlCD5  CD5抗體 規(guī)格: 0.1ml

Moraxella bovoculi牛眼莫拉氏探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周phospho-Alpha synuclein(Tyr133)  磷酸化核突觸蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1mlCK II Alpha/STK  絲/蘇蛋白質(zhì)激抗體Casein kinase Ⅱα(CKⅡα) 規(guī)格: 0.1ml

Inonotus weirii松干基褐腐病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周KCNC4/KV3.4  離子通道蛋白Kv3.4抗體 規(guī)格: 0.2mlCWH43  細(xì)胞壁合成蛋白43抗體 規(guī)格: 0.2ml

Karolinska Institute Polyomavirus（KAPyV）KI多瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周HIPK3  Fas相互作用蛋白激3抗體 規(guī)格: 0.2mlIRS-3  胰島素受體底物-3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Monkey Pox Virus(MPV)猴痘病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周GRB10  生因子受體結(jié)合蛋白10抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Guinea pig IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml

Mycocentrospora acerina香菜腐爛病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周HRH1  組胺受體H1抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-FADD(Ser191)  磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

麻疹/風(fēng)疹雙重探針法熒光定量PCR試劑盒 定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周GAPDH   3-磷酸甘油醛脫抗體(內(nèi)參抗體) 0.1mlPhospho-PDGFRA(Tyr849)/PDGFRB(Tyr857)  磷酸化小板源性生因子受體α/β抗體 規(guī)格: 0.1ml

Spiroplasma citri柑橘頑固病螺原體染料法熒光定量PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 -20℃ 一年 2-4周pan methyl Lysine  泛甲基賴抗體 規(guī)格: 0.2mlAurora C  有絲分裂激B抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix rehmanniae preparata熟地黃染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgM 規(guī)格: 0.1mlphospho-c-kit(Tyr936)  磷酸化原基因c-kit抗體 規(guī)格: 0.1ml

OTTOⅠ解離液說明書人去唾液酸糖蛋白受體1(ASGR1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human ASGR1 (Asialoglycoprotein Receptor 1) ELISA Kit

人酸性神經(jīng)鞘磷脂(ASM)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human ASM (Acid Sphingomyelinase) ELISA Kit

人絲裂原活化蛋白激14(MAPK14)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human MAPK14 (Mitogen Activated Protein Kinase 14) ELISA Kit

人無孢蛋白(ASPN)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human ASPN (Asporin) ELISA Kit

人天氨基轉(zhuǎn)移(AST)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human AST (Aspartate Aminotransferase) ELISA Kit

人血管緊張肽A(ATA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human ATA (Angiotensinase A) ELISA Kit

人毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變因子(ATM)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human ATM (Ataxia Telangiectasia Mutated) ELISA Kit

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人轉(zhuǎn)錄激活因子1(ATF1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human ATF1 (Activating Transcription Factor 1) ELISA Kit

人轉(zhuǎn)錄激活因子2(ATF2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human ATF2 (Activating Transcription Factor 2) ELISA Kit

人轉(zhuǎn)錄激活因子3(ATF3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human ATF3 (Activating Transcription Factor 3) ELISA Kit

人轉(zhuǎn)錄激活因子4(ATF4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human ATF4 (Activating Transcription Factor 4) ELISA Kit

人轉(zhuǎn)錄激活因子6(ATF6)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human ATF6 (Activating Transcription Factor 6) ELISA Kit

人腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1(ABCG1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  Human ABCG1 (ATP Binding Cassette Transporter G1) ELISA Kit