小鼠小腦顆粒細(xì)胞-上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	BJ-X97362

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產(chǎn)品名稱	小鼠小腦顆粒細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)	BJ-X97362

商品屬性：

名稱 小鼠小腦顆粒細(xì)胞

2.組織來源：腦組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠小腦顆粒細(xì)胞分離自小腦皮層組織；神經(jīng)元是神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結(jié)構(gòu)與功能單位，小腦顆粒神經(jīng)元是體積較小的神經(jīng)元，直徑約10μm，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量非常豐富，近乎神經(jīng)元數(shù)量的一半。由于小腦神經(jīng)元的生長、分化和大腦皮層神經(jīng)元相似，而且數(shù)量多、便于取材，因此小腦顆粒神經(jīng)元是研究神經(jīng)元生長發(fā)育、神經(jīng)軸突再生及神經(jīng)疾病發(fā)生機(jī)制和臨床神經(jīng)藥理的重要手段。小腦顆粒神經(jīng)元是小腦主要的中間神經(jīng)元，在哺乳動(dòng)物的小腦內(nèi)數(shù)量最為豐富。顆粒神經(jīng)元的軸突與苔狀纖維和爬行纖維相聯(lián)系，形成小腦皮層內(nèi)的神經(jīng)元環(huán)路，在小腦的神經(jīng)活動(dòng)中起著非常重要的作用。在動(dòng)物傳染性海綿狀腦病中，病變可波及小腦顆粒神經(jīng)元，導(dǎo)致小腦皮層的神經(jīng)元環(huán)路受損，從而呈現(xiàn)神經(jīng)性行為失調(diào)。研究小腦顆粒神經(jīng)元在動(dòng)物傳染性海綿狀腦病病理學(xué)變化中的反應(yīng)、病理發(fā)生的機(jī)理特別是分子機(jī)理，有賴于小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞模型的建立。小腦顆粒細(xì)胞的軸突是沿冠狀軸分布的平行纖維，正是這種排列保證了興奮的單向傳導(dǎo)，這是小腦功能理論中的關(guān)鍵假設(shè)，小腦顆粒細(xì)胞通過g-氨基丁酸接受戈?duì)柤?xì)胞的抑制性突觸的信息傳入。

5.方法簡介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠小腦顆粒細(xì)胞采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠小腦顆粒細(xì)胞經(jīng)NSE免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基含B-27、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M112

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人抗尾狀核(CN)自身抗體免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子D(VEGF-D)免疫試劑盒*直銷

小鼠骨橋素(OPN)免疫試劑盒*直銷

兔子組胺(HIS)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人轉(zhuǎn)錄中介因子1-β(TRIM28/KAP1/RNF96/TIF1B)免疫試劑盒*直銷

人膜聯(lián)蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人蛋白體(prosome,macropain)亞基,β型,1(PSMB1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人N(ε)羧乙基賴(?

小鼠小腦顆粒細(xì)胞Duck Hepatitis Virus(DHV)鴨肝炎病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Nav1.5/SCN5A 電壓門控鈉通道5α抗體規(guī)格: 0.2mlInvolucrin 囊包蛋白/內(nèi)披蛋白抗體 0.2ml

Rhizoma drynariae骨碎補(bǔ)LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周PDGFRA 小板源性生因子受體A抗體(PDGFRα) 規(guī)格: 0.1mlPhospho-MYPT1(Thr696) 磷酸化肌球蛋酸抗體規(guī)格: 0.1ml

Nipah Virus(NiV)尼帕病毒RT-LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周CCL17/ABCD2 胸活化調(diào)節(jié)趨化因子抗體規(guī)格: 0.1mlPI3 Kinase p110 beta 磷脂酰肌醇激（PI3Kβ）抗體規(guī)格: 0.1ml

Aethina tumida蜂房小甲蟲探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Rabbit Anti-horse IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1mlCYP2C9 細(xì)胞色素P450 2C9抗體規(guī)格: 0.1ml

Lumpy Skin Disease Virus(LSDV)疙瘩皮膚病病毒染料法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周Rarres3/TIG3 受體應(yīng)答蛋白3抗體規(guī)格: 0.1mlNR2D/NMDAR2D 谷受體2D抗體規(guī)格: 0.1ml

Stachybotrys spp.葡萄狀穗霉屬通用LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周MLH1/hMLH 1 錯(cuò)配修復(fù)蛋白1抗體規(guī)格: 0.1mlPhospho-PTEN(Ser380/Thr382/Thr383) 磷酸化瘤抑制基因PTEN抗體規(guī)格: 0.1ml

Molluscum Contagiosun Virus(MCV)傳染性軟疣病毒探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周HAX1 造干細(xì)胞特異性相關(guān)結(jié)合蛋白1抗體規(guī)格: 0.2mlIumbrokinase 蚓激抗體規(guī)格: 0.1ml

Bacillus amyloliquefaciens解淀粉芽孢桿PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次低溫負(fù)20度一年 1-3天HES1 轉(zhuǎn)錄因子HES-1抗體 0.2mlRabbit Anti-human IgG F(ab')2/AP 堿性磷酸（AP）標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格: 0.1ml

Pericarpium arecae大腹皮染料法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周phospho-CREB-1(Ser133) 磷酸化CREB-1抗體規(guī)格: 0.1mlSox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Vesicular Stomatitis Virus(VSV)水泡性口炎病毒RT-LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Pregnancy zone protein 娠區(qū)帶蛋白PZP抗體規(guī)格: 0.2mlIL-20R alpha/IL20RA 白介素20受體α鏈抗體規(guī)格: 0.2ml

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。