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貨號	BJ-X97366

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

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產(chǎn)品名稱	大鼠嗅鞘細胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	BJ-X97366

商品屬性：

名稱 大鼠嗅鞘細胞

2.組織來源：嗅球組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠嗅鞘細胞分離自嗅球組織；嗅鞘細胞（OECs）是在功能上介于施旺細胞和少突膠質(zhì)細胞之間的一種特殊的膠質(zhì)細胞，具有神經(jīng)營養(yǎng)、抑制膠質(zhì)增生、瘢痕形成、成鞘作用等；為軸突生長提供了適宜的微環(huán)境及較強的遷移的特性，使其成為促進中樞神經(jīng)再生的理想候選細胞之一。嗅鞘細胞是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以再生細胞之一，其特點為終身具有神經(jīng)再生功能，還能夠釋放多種神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)粘附分子。被認為是髓鞘化能力*的膠質(zhì)細胞，逐漸用于治療脊髓損傷。嗅鞘細胞與膠質(zhì)細胞、雪旺細胞在表現(xiàn)型上有共同點，它們都能促進軸突的再生，主要區(qū)別在于嗅鞘細胞不但存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，也存在于外周神經(jīng)中。嗅鞘細胞被認為是一種可塑性很高的細胞，它可表現(xiàn)出多種細胞形態(tài)和細胞表面標志，在嗅系統(tǒng)發(fā)育過程中，嗅鞘細胞根據(jù)其在組織定位的不同而有不同的抗原表型，其中P75NTR、GFAP、和O4可標記大部分在體嗅鞘細胞，然而在嗅球外神經(jīng)層O4陽性嗅鞘細胞仍然可以在P75NTR陽性細胞層內(nèi)分化成E-NCAM陽性的細胞層，還有一定比率的嗅鞘細胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽性。嗅黏膜中的神經(jīng)元是生后才生長并在成年時繼續(xù)分化的神經(jīng)元，壽命為4-12周，隨著新細胞的生長，又建立了新的神經(jīng)支配關(guān)系。嗅鞘細胞存在于嗅神經(jīng)及嗅球的神經(jīng)層上，沿嗅神經(jīng)的全長，從周圍神經(jīng)系統(tǒng)到中樞神經(jīng)分布。

5.方法簡介：

()實驗室分離的大鼠嗅鞘細胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法、結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實驗室分離的大鼠嗅鞘細胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-R113

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)上皮細胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人抗皮膚抗體(ASA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠末端補體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)免疫試劑盒*直銷

大鼠白三烯C4(LTC4)免疫試劑盒*直銷

魚白介素8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒進口、分裝

MSA培養(yǎng)基英文名稱：MSA Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

AK瓊脂（2號）英文名稱：AK Agar（No.2）產(chǎn)品規(guī)格：250g

豬促卵泡素(FSH)免疫試劑盒進口、分裝

小鼠腦啡肽原A(PENK)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠Tau蛋白免疫試劑盒進口、組裝

人胃內(nèi)因子(GIF)免疫試?

大鼠嗅鞘細胞Pseudomonas syringae pv. maculicola丁香假單胞桿斑點致病變種PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Nitrotyrosine 硝基酪抗體規(guī)格: 0.2ml

Nodus nelumbinis rhizomatis藕節(jié)PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周Phospho-PAK1(Thr423)/PAK2 (Thr402) 磷酸化p21激活激1/2抗體規(guī)格: 0.1ml

Aspergillus ochraceus赭曲霉LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Donkey Anti-Guinea pig IgG/FITC FITC標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml

Rotavirus B輪狀病毒B群探針法熒光定量RT-PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周CK18 細胞角蛋白18抗體規(guī)格: 0.1ml

Radix angelicae dahuricae白芷探針法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周COL6A5/Collagen VI alpha 5 6型膠原蛋白α5抗體規(guī)格: 0.2ml

Acinetobacter baumannii鮑氏不動桿（鮑曼不動桿）LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周BEND3 BEND3蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Fasciola spp.大片吸蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周MCP-3/CCL7 單核細胞趨化蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml

Arillus longan龍眼肉LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周ELAVL1/HuR ELAVL1抗體規(guī)格: 0.2ml

Human T-cell Lymphoma Virus 1(HTLV-1)人類嗜T淋巴病毒1型RT-LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周SHPRH 組蛋白連接作用蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Mycoplasma haemocanis犬血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Rabbit Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml