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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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萊氏無(wú)膽甾原體PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-08-03 09:30:15瀏覽次數(shù):113次

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  • 產(chǎn)地 國(guó)產(chǎn) 加工定制
    適用領(lǐng)域 科研 貨號(hào) BJ-P6327
    萊氏無(wú)膽甾原體PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:CCDC116 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白116抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-IRS-1(Ser307) 磷酸化胰島素受體底物p-IRS-1/2抗體 規(guī)格: 0.1mlClaudin 8 緊密連接蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2mlc-Abl/Abl1 非受體酪激c-Abl抗體 0.1mlGoat Anti-Mouse IgM/PE-C

    實(shí)驗(yàn)過(guò)程:

    一、試劑準(zhǔn)備

    1. DNA模板

    2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)

    3.10×PCR Buffer

    4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

    5.Taq酶

    特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

    產(chǎn)品名稱

    英文名稱

    規(guī)格

    貨號(hào)

    萊氏無(wú)膽甾原體PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒

    Acholeplasma laidlawii PCR

    多種規(guī)格

    BJ-P6327

    2.jpg

    特點(diǎn):

    1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供病毒樣品。

    2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。

    3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

    4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。

    5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

    6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

    儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。

    PCR檢測(cè)試劑盒 (2).jpg


     

    二、操作步驟

    1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。

    10×PCR buffer             5μl

    dNTP mixl                 4μl

    引物110pM              2μl

    引物210PM             2μl

    Taq酶(2U/μl           1μl

    DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl

    ddH2O              50 μl

    PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。

    2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。

    3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

    4PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

    三、注意事項(xiàng)

    1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。

    2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。

    3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。

    4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。

    5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。

    6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。

    7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。

     

     

    操作流程

    1. 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

    2. 為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。

    3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。

    4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。

    5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。

    6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

    7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。

    8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。

    9. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。

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