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商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

犬表達(dá)于SiSo細(xì)胞系的受體結(jié)合型腫瘤抗原(EBAG9)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

雞游離脂肪酸(FFA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

Human cleaved microtubule-associated protein tau(C-MAPT/C-TAU)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

膽硫乳瓊脂（DHL） 英文名稱：Deoxycholate ows\system32\EhStorShell.dll

肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞Enterococcus faecium 屎腸球探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周DRAK2  DAP凋亡誘導(dǎo)蛋白激2抗體 規(guī)格: 0.2mlUBR7/C14orf130  14號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框130抗體 規(guī)格: 0.2ml

Human Parainfluenza Virus 1(HPIV-1)人副流感病毒1型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周BLNK  B淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-PLC gamma 2 (Tyr759)  磷酸化磷酯Cγ2抗體 規(guī)格: 0.1ml

螺源性成分LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Paxillin(Tyr88)  磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 規(guī)格: 0.1ml

Penicillium viridicatum純綠青霉LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-pig IgG/APC  APC標(biāo)記的兔抗豬IgG 規(guī)格: 0.1mlIL-2  白介素2抗體（大、小鼠） 規(guī)格: 0.2ml

Xanthomonas campestris pv. glycines野油菜黃單胞大豆致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Bak  Bcl-2同源拮抗劑抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Herba leonuri益母草PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Desmoglein 3/DSG3  橋粒芯蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.1ml

Porcine Sapovirus(PoSaV)豬札如病毒(札幌病毒)RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周c-Maf  原基因cMAF抗體 規(guī)格: 0.2mlV5 tag  V5 tag標(biāo)簽抗體 規(guī)格: 0.1ml

Plasmodium spp.瘧原蟲(chóng)通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Phospho-CHK2 (ser19)  磷酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體 規(guī)格: 0.1mlSERPING1/C1 Inactivator  酯抑制蛋白C1IN抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rhizoma zingiberis干姜探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Phospho-beta-Arrestin 1(Ser412)  磷酸化β抑制蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1mlTBX18  轉(zhuǎn)錄因子Tbx18抗體 規(guī)格: 0.2ml

Raillietina spp.瑞氏絳蟲(chóng)通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CCDC47  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-NPM (Ser4)  磷酸化核仁磷酸蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。