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貨號 | BJ-01R3454 |
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使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
公司產(chǎn)品具有質量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱:可溶性果膠提取試劑價格
貨號:BJ-01R3454
規(guī)格:2×500ml
分類:細胞組分分離
儲存條件:室溫,24個月
用途:主要用于提取植物組織或果實中可溶性果膠。
注意事項:天然果膠類物質以原果膠、果膠(Pectin)、果膠酸的形態(tài)廣泛存在于植物的果實、根、莖、葉中,是細胞壁的一種組成成分,它們伴隨纖維素而存在,構成相鄰細胞中間層粘結物,使植物組織細胞緊緊黏結在一起。原果膠是不溶于水的物質,但可在酸、堿、鹽等化學試劑及酶的作用下,加水分解轉變成水溶性果膠。果膠(Pectin)又稱多聚半乳糖醛酸,是由D-半乳糖醛酸以α-1,4糖苷鍵連接形成的直鏈狀聚合物,本質上是一種線形的多糖聚合物,含有數(shù)百至約1000個脫水半乳糖醛酸殘基,其相應的平均相對分子質量為50000~150000。
注意事項:
1、盡注意無菌操作,避免污染。
2、避免反復凍融。
3、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
標準溶液的配制:
1.直接配制法 對于純凈的物質(稱做基準物質)可準確進行稱量,用蒸餾水溶解后,轉移到一定容積的容量瓶中稀釋至標線,溶液的準確濃度可以直接計算出來。溶質的純度、性質等對濃度有較大影響,為此,對用來直接配制標準溶液用的基準物質必須具備以下條件:
(1)物質的純度要高,含量不得低于99.9%,雜質的含量應當少到可以忽略的程度。
(2)物質的分子組成應與其化學式*符合,包括結水合物中的結品水含量也必須與其化學式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。
(3)性質穩(wěn)定,貯蔵時應不發(fā)生變化,不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分,不易風化潮解和被空氣氧化,烘干時不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準物質以減小稱量誤差。
2.間接配制法 凡不符合基準物質條件的物質,可先配制成近似所需濃度的溶液,再用基準物質溶液或能與其發(fā)生定量反應的標準溶液進行滴定,求其準確濃度,這種通過滴定來確定準確濃度的操作叫做“標定"。間接法配制近似濃度溶液時不需用分析天平稱量和容量瓶配制,可用臺秤、量筒等器皿。將稱好的物質轉移到干凈的試劑瓶中,先加少量蒸餾水將其溶解,繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準物的條件,故間接法配制標準溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質;濃鹽酸因易揮發(fā)而無法準確稱量;不易得到分析純級的試劑等,這些物質的標準溶液須用間接法來配制,經(jīng)標定后再做標準溶液使用。
標準溶液的標定:
1.用基準物質標定法
(1)多次稱量法 用減重法精密稱取幾份(如2~3份)基準物質,分別倒入編號的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi),各加少量蒸餾水溶解,再加指示劑后分別用待標定溶液滴定至等當點,各自記錄所消耗待標定溶液的體積,結合基準物質的重量分別算出溶液的準確濃度,最后取平均值做為標準溶液的濃度。
(2)移液管法 精密稱取一份基準物質,在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解,順玻棒全部轉移到已校正好的容量瓶中,多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中,最后配成一定體積的溶液,混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉移至錐形瓶中,加指示劑后用待標定溶液滴定至等當點,每次做好記錄,根據(jù)所消耗待標定溶液的體積,結合基準物質的重量,分別算出溶液的準確濃度取平均值做為標準溶液的濃度。
2.比較法標定 如果待標定溶液能與某標準溶液進行反應,可吸量一定體積的某標準溶液,用待標定溶液滴定,或吸量一定體積的待標定溶液,用某標準溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標準溶液的濃度,按N1V1=N2V2式可以計算出待標定溶液的準確濃度。這種用標準落液來測定待標定溶液準確濃度的過程稱為“比較法"標定。如果某標準溶液的濃度由于某些原因不夠準確時,就會直接影響待標定溶液濃度的準確性,顯然比較法不如用基準物質直接標定的方法精確,但比較法簡便易行。
標定完畢,蓋緊標準溶液試劑瓶塞,瓶簽上注明標準溶液名稱、準確濃度和日期等。
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Tilletia indica Mitra小麥印度腥黑穗病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Prohibitin 抑制素/瘤抑制因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
Herba scutellariae barbatae半枝蓮PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Jab1 Jun激活區(qū)域-連接蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Streptomyces spp.通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Cyclophilin F 親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIF抗體 規(guī)格: 0.2ml
Giardia lamblia藍氏賈第鞭毛蟲B型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ADCK3/CABC1 伴侶蛋白bc1同源復合體抗體 規(guī)格: 0.2ml
Semen sterculiae lychnophorae胖大海LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周phospho-IKK beta(Ser471) 磷酸化KB抑制蛋白激β抗體 規(guī)格: 0.1ml
Haemophilus suis豬嗜血桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MRP3 多藥耐藥相關蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Providencia rettgeri雷氏普羅威登斯探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ENC1/KLHL35 外胚層神經(jīng)皮層蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Cymbidium Mosaic Virus(CymMV)蘭花花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周VMAT1/VAT1 嗜鉻顆粒胺轉運蛋白VAT1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Folium artemisiae argyi艾葉PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周KiSS1R/GPR54 G蛋白偶聯(lián)受體54抗體 規(guī)格: 0.1ml
可溶性果膠提取試劑價格大鼠O型蛋白磷酸受體(PTPRO)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠3(PR3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠原鈣粘蛋白1(PCDH1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠GRB2相關的受體蛋白2(GRAP2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
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大鼠肺表面活性物質相關蛋白C(SPC)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠肺表面活性物質相關蛋白D(SPD)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠丙酮酸脫氫α(PDHA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠丙酮酸脫氫激同工4(PDK 4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠丙酮酸脫氫磷酸(PDP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠肝和紅細胞丙酮酸激(PK)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
大鼠丙酮酸激M2型同工(M2-PK)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
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