龜分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒探針法-上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

產(chǎn)地	國(guó)產(chǎn)	加工定制	否
適用領(lǐng)域	科研	貨號(hào)	BJ-P9811

操作流程

1. 整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。

4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。

5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。

6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

7. 儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。

8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號(hào)
龜分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒探針法	Mycobacterium cheloei	多種規(guī)格	BJ-P9811

特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。

2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。

3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè)，避免后續(xù)污染。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

儲(chǔ)存條件：-20℃以下，有效期12個(gè)月。

PCR檢測(cè)試劑盒 (2).jpg

實(shí)驗(yàn)過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer 5μl

dNTP mixl 4μl

引物1（10pM） 2μl

引物2（10PM） 2μl

Taq酶（2U/μl） 1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

三、注意事項(xiàng)

１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。

２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。

３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。

４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。

５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。

６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。

７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。

AML細(xì)胞分化抑制劑(UM729)UM7291mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

PDE4型抑制劑（Roflumilast N-oxide）Roflumilast N-oxide1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

磷酸二酯酶抑制劑(Papaverine)Papaverine1mL(10mM)|100mg

COX-1和COX-2抑制劑(Oxaprozin)Oxaprozin1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

DPIV和DP8/9抑制劑H-Lys(4-nitro-Z)-pyrrolidide1mL(10mM)|50mg

FXR和GPBAR1雙重激動(dòng)劑(BAR502)BAR5021mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

SIRT1激活劑(CAY10602)CAY106021mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

mAChR抑制劑（Methylbenactyzium Bromide）Methylbenactyzium Bromide1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg

誘導(dǎo)型NO合成酶抑制劑（L-NIL）L-NIL1mL(10mM)|50mg|100mg

hERG K+電流抑制劑(Cloperastine fendizoate)Cloperastine fendizoate1mL(10mM)|100mg

龜分枝桿菌熒光定量PCR試劑盒探針法食蟹猴 HVEM / TNFRSF14 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)環(huán)境鈉離子（Na）濃度化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次

食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)食物鈉離子（Na）濃度化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次

大鼠 TrkA / NTRK1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)飲料鈉離子（Na）濃度化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次

大鼠 B7-H3 / CD276 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)細(xì)鈉離子（Na）濃度化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次

大鼠 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)酵母鈉離子（Na）濃度化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次

大鼠 CLEC14A / EGFR-5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)細(xì)胞鈉離子（Na）濃度熒光定量檢測(cè)試劑盒 20次

大鼠 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)組織鈉離子（Na）濃度熒光定量檢測(cè)試劑盒 20次

大鼠 Growth Hormone Receptor / GHR / GHBP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)鋅（Zn）定量檢測(cè)試劑盒 50次

小鼠 CD45 / PTPRC 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)氯（Cl）定量檢測(cè)試劑盒 50次

小鼠 AGRP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)血液鈣（Ca）定量檢測(cè)試劑盒 50次

人 GITR / TNFRSF18 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)血液鎂離子（Mg）濃度化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒 50次

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