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當前位置：上海邦景實業(yè)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>熒光定量PCR試劑盒>> 海水派琴蟲熒光定量PCR試劑盒探針法
| 產地 | 國產 | 加工定制 | 否 |
|---|---|---|---|
| 適用領域 | 科研 | 貨號 | BJ-P9931 |
特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
海水派琴蟲熒光定量PCR試劑盒探針法 | Perkinsus marinus | 多種規(guī)格 | BJ-P9931 |
特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲存條件：-20℃以下，有效期12個月。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 １．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個專用的PCR實驗室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 ４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
TRITC標記親和素Rhodamine (TRITC)-conjugated Streptavidin10μl
熒光素標記親和素Fluorescein (DTAF)-conjugated Streptavidin10μl
HRP標記親和素Peroxidase-conjugated Streptavidin10μl
濃度：1.0mg/ml建議工作濃度：0.01-0.1μg/ml(WB with ECL),1-2μg/ml(elisa,IHC,WB)Buffer：0.01M 磷酸鈉，0.25M NaCl，pH 7.6
濃度：1.8mg/ml建議工作濃度：2～5μg/ml熒光劑：5-(4，6-dichlorotriazinyl) Aminofluorescein (5-DTAF)；Amax = 492 nm: Emax = 520 nm
100×蛋白酶K10×Proteinase K0.2ml|1ml
50×蛋白酶K5×Proteinase K40μl
EGFP標記Annexin VAnnexin V-EGFP Reagent100μl(20T)
FITC標記Annexin VAnnexin V-FITC Reagent100μl(20T)
重組人KGF-2Recombinant human keratinocyte growth factor10μg|50μg|200μg|3mg
海水派琴蟲熒光定量PCR試劑盒探針法小鼠 HVEM / TNFRSF14 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)組織尿激（UROKINASE）活性熒光定量檢測試劑盒 20次
人 EphB6 / EPHB6 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)血液尿激（UROKINASE）活性熒光定量檢測試劑盒 20次
人 TNFRSF4 / CD134 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)體液尿激（UROKINASE）活性熒光定量檢測試劑盒 20次
小鼠 CPB1 / PCPB 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)細胞尿激（UROKINASE）活性比色法定量檢測試劑盒 20次
小鼠 DR6 / TNFRSF21 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)組織尿激（UROKINASE）活性比色法定量檢測試劑盒 20次
人 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)血液尿激（UROKINASE）活性比色法定量檢測試劑盒 20次
人 GFRA1 / GFRα1 / GDNFRA 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)體液尿激（UROKINASE）活性比色法定量檢測試劑盒 20次
人 CD102 / ICAM2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)細胞肌酸激（CK）總活性比色法定量檢測試劑盒 25次
人 KLK7 / PRSS6 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)組織肌酸激（CK）總活性比色法定量檢測試劑盒 25次
人 OLFM4 / Olfactomedin-4 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)體液肌酸激（CK）總活性比色法定量檢測試劑盒 25次
小鼠 FGF18 / FGF-18 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)細胞肌酸激（CK）總活性連續(xù)循環(huán)比色法 20次
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