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產(chǎn)地	國(guó)產(chǎn)	加工定制	否
適用領(lǐng)域	科研	貨號(hào)	BJ-P7019

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號(hào)
田鼠分枝桿菌PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒	Mycobacterium microtiPCR	多種規(guī)格	BJ-P7019

圖片

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer 5μl

dNTP mixl 4μl

引物1（10pM） 2μl

引物2（10PM） 2μl

Taq酶（2U/μl） 1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

三、注意事項(xiàng)

１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。

２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。

３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。

４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。

５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。

６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。

７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。

操作流程

1. 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

2. 為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。

3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。

4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。

5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。

6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

7. 儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。

8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

9. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。

125mL Triton Lysis Buffer with Glycerol,2X Triton Lysis Buffer with Glycerol,2X 常溫保存ONPG發(fā)酵管進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)ONPG發(fā)酵管20支BR

0.1mg 山羊抗小鼠IgG，熒光素555標(biāo)記 Goat Anti-Rabbit IgG ,IF555 Conjugate 4℃保存 7.8-500 pg/mL. 人白介素15(IL-15)ELISA試劑盒

2 ug pIL253 pIL253 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Angiopoietin-related protein 4

欣 Fortum 3mg/支*5 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Cyclin-dependent kinase 5

100g RNSDS (十二烷基) 常溫 0.312-20 ng/mL 人抵抗素(RETN)ELISA試劑盒

2.5g 木聚糖 Xylan 室溫干燥保存

2 ug pSos MAFB pSos MAFB 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Adenomatous polyposis coli protein

MKTTn肉湯（ISO） MKTTn Broth 250g牛膽酸進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Cholic acid25克BR，98%

2 ug pLVX-ZsGreen1-N1 pLVX-ZsGreen1-N1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Serine/arginine-rich splicing factor 2

麥芽糖發(fā)酵管 20支 0.312-20 ng/mL 人臂板蛋白-3G(SEMA-3G)ELISA試劑盒

半固體瓊脂 Semi-solid agar 250g 78-5000 pg/mL 人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒

田鼠分枝桿菌PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒Dimethylenastron Eg5抑制劑(Dimethylenastron) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

IMR-1A Notch抑制劑(IMR-1A) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

Phen-DC3 Trifluoromethanesulfonate 解旋酶FANCJ和DinG抑制劑 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg

Trichlormethine hydrochloride 細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑（Trichlormethine hydrochloride） 1mL(10mM)|100mg

IDO-IN-3 IDO抑制劑(IDO-IN-3) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

Fadrozole aromatase抑制劑(Fadrozole) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

QS11 ADP-核糖基化因子1的GTP酶活化蛋白抑制劑(QS11) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

Tetrabenazine (+)- VMAT-2抑制劑(Tetrabenazine (+)-) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

MK-2461 c-Met抑制劑(MK-2461) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

EMD534085 kinesin-5抑制劑(EMD534085) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg

BI-847325 MEK和極光激酶(AK)雙重抑制劑(BI-847325) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

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