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貨號(hào)	BJ-X97386

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產(chǎn)品名稱	小鼠角膜上皮細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)	BJ-X97386

商品屬性：

名稱 小鼠角膜上皮細(xì)胞

2.組織來源：眼角膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠角膜上皮細(xì)胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。其主要功能如下：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能，分三層細(xì)胞層，外層即是上皮細(xì)胞；②角膜上皮細(xì)胞能參與先天性免疫，能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號(hào)從而激活角膜防御系統(tǒng)；③角膜上皮細(xì)胞能高效表達(dá)醛脫氫酶。角膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)對(duì)研究角膜的生理學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)都是極為重要的手段，常用于研究細(xì)胞代謝產(chǎn)物、病毒感染、各種生長(zhǎng)因子和藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠角膜上皮細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠角膜上皮細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M120

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人堿性(ALP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人糖原化同工BB(GP-BB)免疫試劑盒*直銷

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大鼠D(VD)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠骨橋素(OPN)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

CIN-1瓊脂平板（9cm）英文名稱：CIN-1 Agar 產(chǎn)品規(guī)格：?

小鼠角膜上皮細(xì)胞Porcine Circovirus 1 (PCV-1)豬圓環(huán)病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 1-2周Phospho-Connexin 43(Ser368) 磷酸化Connexin 43蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Radix ephedrae麻黃根LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周Rabbit Anti-Goat IgM/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml

St.Louis Encephalitis Virus(SLEV)圣路易斯腦炎病毒RT-LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 規(guī)格: 0.1mlSNTG2/Syntrophin 5 肌蛋白結(jié)合蛋白γ2抗體規(guī)格: 0.2ml

Alastrim Virus類天花病毒探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周LRRC4B/NGL3 神經(jīng)突觸蛋白NGL3抗體規(guī)格: 0.2mlphospho-STAT5a(Tyr694) 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5a抗體規(guī)格: 0.1ml

Diaporthe helianthi向日葵莖潰瘍病PCR試劑盒植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周IGF1R/CD221 胰島素樣生因子1受體抗體規(guī)格: 0.1mlNectin 2/CD112 細(xì)胞粘附分子CD112抗體規(guī)格: 0.1ml

鱈魚源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周ANGPTL5 管生成素相關(guān)蛋白5 規(guī)格: 0.2mlEgr1 早期生應(yīng)答蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml

Marek's Disease Virus(MDV)馬立克氏病病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周BGP/Osteocalcin 骨保護(hù)蛋白/骨鈣素抗體規(guī)格: 0.1mlDonkey Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml

Canine Norovirus 犬諾瓦克病毒染料法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周TAG1/CNTN2 瞬時(shí)表達(dá)軸索糖蛋白1抗體規(guī)格: 0.1mlCXCR5/CD185 細(xì)胞表面趨化因子受體5抗體規(guī)格: 0.1ml

Influenza Virus A甲型流感（）病毒H5N2亞型RT-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周Ninein/GSK3B interacting protein GSK3B相互作用蛋白抗體規(guī)格: 0.2mlAxin 2 軸抑制蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml

Anaplasma marginale邊緣無漿體(無形體)LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周phospho-HSF1(Ser303) 磷酸化熱休克因子1抗體規(guī)格: 0.2mlPAR-1/Thrombin receptor 蛋白激活受體-1抗體規(guī)格: 0.1ml

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。