使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）     轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

公司產(chǎn)品具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品名稱：一氧化氮合酶染色液說明書

貨號(hào)：BJ-01R3666

規(guī)格：5×20ml

分類：酶類染色

儲(chǔ)存條件：4℃,避光,6個(gè)月

用途：一氧化氮合酶染色，也稱作NOS染色液

注意事項(xiàng)：主要由四氮唑藍(lán)孵育液、陰性對(duì)照組成。染色后酶活性部位呈藍(lán)色沉淀。

注意事項(xiàng)：

1、盡注意無菌操作，避免污染。

2、避免反復(fù)凍融。

3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：

1.直接配制法    對(duì)于純凈的物質(zhì)(稱做基準(zhǔn)物質(zhì))可準(zhǔn)確進(jìn)行稱量，用蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到一定容積的容量瓶中稀釋至標(biāo)線，溶液的準(zhǔn)確濃度可以直接計(jì)算出來。溶質(zhì)的純度、性質(zhì)等對(duì)濃度有較大影響，為此，對(duì)用來直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液用的基準(zhǔn)物質(zhì)必須具備以下條件：

(1)物質(zhì)的純度要高，含量不得低于99.9％，雜質(zhì)的含量應(yīng)當(dāng)少到可以忽略的程度。

(2)物質(zhì)的分子組成應(yīng)與其化學(xué)式*符合，包括結(jié)水合物中的結(jié)品水含量也必須與其化學(xué)式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質(zhì)穩(wěn)定，貯蔵時(shí)應(yīng)不發(fā)生變化，不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分，不易風(fēng)化潮解和被空氣氧化，烘干時(shí)不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準(zhǔn)物質(zhì)以減小稱量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準(zhǔn)物質(zhì)條件的物質(zhì)，可先配制成近似所需濃度的溶液，再用基準(zhǔn)物質(zhì)溶液或能與其發(fā)生定量反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，求其準(zhǔn)確濃度，這種通過滴定來確定準(zhǔn)確濃度的操作叫做“標(biāo)定"。間接法配制近似濃度溶液時(shí)不需用分析天平稱量和容量瓶配制，可用臺(tái)秤、量筒等器皿。將稱好的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到干凈的試劑瓶中，先加少量蒸餾水將其溶解，繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準(zhǔn)物的條件，故間接法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質(zhì)；濃鹽酸因易揮發(fā)而無法準(zhǔn)確稱量；不易得到分析純級(jí)的試劑等，這些物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液須用間接法來配制，經(jīng)標(biāo)定后再做標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：

1.用基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定法

(1)多次稱量法    用減重法精密稱取幾份(如2～3份)基準(zhǔn)物質(zhì)，分別倒入編號(hào)的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi)，各加少量蒸餾水溶解，再加指示劑后分別用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，各自記錄所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度，最后取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱取一份基準(zhǔn)物質(zhì)，在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解，順玻棒全部轉(zhuǎn)移到已校正好的容量瓶中，多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定體積的溶液，混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加指示劑后用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，每次做好記錄，根據(jù)所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量，分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

2.比較法標(biāo)定    如果待標(biāo)定溶液能與某標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行反應(yīng)，可吸量一定體積的某標(biāo)準(zhǔn)溶液，用待標(biāo)定溶液滴定，或吸量一定體積的待標(biāo)定溶液，用某標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，按N1V1＝N2V2式可以計(jì)算出待標(biāo)定溶液的準(zhǔn)確濃度。這種用標(biāo)準(zhǔn)落液來測(cè)定待標(biāo)定溶液準(zhǔn)確濃度的過程稱為“比較法"標(biāo)定。如果某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度由于某些原因不夠準(zhǔn)確時(shí)，就會(huì)直接影響待標(biāo)定溶液濃度的準(zhǔn)確性，顯然比較法不如用基準(zhǔn)物質(zhì)直接標(biāo)定的方法精確，但比較法簡(jiǎn)便易行。

標(biāo)定完畢，蓋緊標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶塞，瓶簽上注明標(biāo)準(zhǔn)溶液名稱、準(zhǔn)確濃度和日期等。

Fructus canarii青果LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Omgp  少突細(xì)胞髓磷脂糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Radix ginseng人參PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周SERINC3  絲合并蛋白3抗體（瘤差異表達(dá)蛋白） 規(guī)格: 0.2ml

Human Rhinovirus 16 人鼻病毒16 LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周MYLK3  肌球蛋白輕鏈激3抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Bovine IgG  羊抗牛IgG 規(guī)格: 1mg

Equine Herpesvirus 4 (EHV-4)馬皰疹病毒4型探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周VAMP-3  囊泡相關(guān)膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlC9orf174  9號(hào)染色體開放閱讀框174抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix dichroae常山探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Phospho-PBK/TOPK(Thr9)  磷酸化PDZ連接激/T-LAK細(xì)胞源蛋白激抗體 規(guī)格: 0.1mlEphA7/Eph receptor A7  酪蛋白激受體A7抗體 規(guī)格: 0.2ml

Chrysomya bezziana倍贊氏金蠅LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周NIT1  水解1抗體 規(guī)格: 0.2mlFAM61B/LSM14B  FAM61B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Classical Swine Fever Virus-WT(CSFV-WT)豬瘟病毒野生株探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-rat IgG  小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 1mgRCBTB1/CLLD7  核苷酸交換因子抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix aucklandiae木香LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周phospho-PTPN7(Ser93)  磷酸化非受體型蛋白酪磷酸7抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-c-Kit(Tyr703)  磷酸化原基因c-kit抗體 規(guī)格: 0.1ml

Arcanobacterium haemolyticum溶血隱秘桿LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周BACE1/ASP2  β分泌抗體 規(guī)格: 0.1mlSA1/Nuclear protein stromal antigen 1  粘結(jié)蛋白SA1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Ureaplasma diversum差異脲原體探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-Rabbit IgM/RBITC  羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格: 0.1mlABI1  ABI1/SSH3BP1蛋白抗體 0.1ml

一氧化氮合酶染色液說明書 質(zhì)量規(guī)格：>99% Clozapine 信號(hào)素4A(SEMA4A)重組蛋白英文名稱：Recombinant Semaphorin 4A (SEMA4A)

寶藿苷I 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支 人Ladinin蛋白1(Lad-1)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠孕/孕(PROG)ELISA試劑盒，英文名：PROG ELISA Kit

補(bǔ)骨脂查爾 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg Fyn結(jié)合蛋白抗體 HAGH ELISA Kit 羥酰肽水解(HAGH)ELISA試劑盒

脲 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： 100mg ELISA Kit for Human Complement factor D小鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(FGF4)ELISA試劑盒，英文名：FGF4 ELISA Kit

表沒食子兒茶素沒食子酯 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： 20mg 微小染色體維持缺陷蛋白7抗體 PⅠCP ELISA Kit Ⅰ型前膠原羧基端原肽(PⅠCP)ELISA試劑盒

沒食子兒茶素 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%,5mg/支 ELISA Kit for Human Amphiregulin小鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒，英文名：EG-VEGF ELISA Kit

健那綠B 質(zhì)量規(guī)格：BS Janus Green B 桿屬 Lactobacillus sp.燼灰鏈霉 Streptomyces cinereogriseus

金色酰胺酯 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg ELISA Kit for Human Extracellular sulfatase Sulf-2大鼠脯氨-4-羥化α多肽Ⅰ(P4Hα1)ELISA試劑盒，英文名：P4Hα1 ELISA Kit

鹽伊達(dá)比星 質(zhì)量規(guī)格：含量960~1030µg/mg,USP30 IdarubicinHCl 木糖-明膠培養(yǎng)基/Xylose Gelatin Medium用于蠟樣芽孢桿明膠液化試驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

苔黑葡萄糖苷;Orcilgluco 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： 20mg 人γ-氨基A受體α2(γABRα2)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠肌球蛋白ⅤA(MYO5A)ELISA試劑盒，英文名：MYO5A ELISA Kit

濱蒿;Scoparone 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞英文名稱：Lec1

水蘇堿 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： 20mg 人半胱氨雙加氧I(CDOI)ELISA試劑盒人96T0.5-32 ng/mL小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落激因子(GMCSF/CSF2)ELISA試劑盒，英文名：GMCSF/CSF2 ELISA Kit

PD0325901 質(zhì)量規(guī)格：>99%,ATP非競(jìng)爭(zhēng)性的MEK抑制劑 PD-0325901 煌綠糖膽鹽肉湯/BGLB肉湯/煌綠糖膽鹽增液/BGLB Broth用于水樣中大腸的檢測(cè)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口