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貨號	BJ-X97104

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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產(chǎn)品名稱	小鼠外周血白細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	BJ-X97104

商品屬性：

名稱 小鼠外周血白細(xì)胞

2.組織來源：外周血

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠外周血白細(xì)胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。白細(xì)胞（Leukocyte），舊稱白血球，血液中的一類細(xì)胞。根據(jù)白細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有無特殊顆粒，可將其分為有粒白細(xì)胞和無粒白細(xì)胞。前者常簡稱為粒細(xì)胞，根據(jù)其特殊顆粒的染色特性，又分為中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，白細(xì)胞也通常被稱為免疫細(xì)胞。在顯微鏡下可以看到，血細(xì)胞中體積比較大、數(shù)量比較少，具有細(xì)胞核；其主要作用是吞噬細(xì)菌、防御疾病。

5.方法簡介：

()實驗室分離的小鼠外周血白細(xì)胞采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實驗室分離的小鼠外周血白細(xì)胞經(jīng)過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-M025

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性懸浮

細(xì)胞形態(tài)圓形

傳代特性不增殖；不傳代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

營養(yǎng)V-B培養(yǎng)基（底層）英文名稱：minimum Nutritional V-B Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

乙酰胺瓊脂英文名稱：Acetamide Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O((LLO)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠化蛋白激B(P-PKB)免疫試劑盒*直銷

小鼠c-fos 免疫試劑盒*直銷

山羊免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人氧化Ⅵα亞基多肽1(COX6A1)免疫試劑盒*直銷

白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)免疫試劑盒*直銷

人甲狀腺ows\system32\EhStorShell.dll

小鼠外周血白細(xì)胞Rhizoma atractylodis蒼術(shù)染料法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周Neurexin 2 軸突蛋白2抗體規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1ml

Babesia trautmanni豬巴貝斯蟲動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周T2R38/TAS2R38 味覺受器蛋白T2R38抗體規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-human IgG/APC APC標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

Aspergillus ochraceus赭曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周PMP2 周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗體規(guī)格: 0.2mlMAL/MPV17 T淋巴細(xì)胞成熟相關(guān)蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Flos mume梅花探針法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周phospho-PRKAA2(Ser173) 苷單磷酸活化蛋白激α2抗體規(guī)格: 0.1mlMARCH1 膜相關(guān)環(huán)指蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

ESBL-Klebsiella pneumoniae超廣譜β-內(nèi)酰胺肺炎克雷伯LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周L-Citrulline L-瓜抗體規(guī)格: 0.2mgABHD13 水解結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體規(guī)格: 0.2ml

Acinetobacter baumannii鮑氏不動桿（鮑曼不動桿）探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周FAST kinase Fas活化的絲/蘇激抗體規(guī)格: 0.1mlUBE2A/UBE2B/RAD6 泛素結(jié)合E2蛋白A抗體規(guī)格: 0.2ml

Radix aristolochiae fangchi廣防己LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周phospho-LSP1 (Ser252) 磷酸化白細(xì)胞F肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體規(guī)格: 0.1mlHIF3 alpha 缺氧誘導(dǎo)因子3α/HIF-3α抗體規(guī)格: 0.1ml

Trypanosoma congolense剛果錐蟲LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周CT DNA(calf thymus DNA) 小牛胸DNA抗體規(guī)格: 0.2ml

Kudoa septempunctata七星庫道蟲探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

Endoconcha sepiae海螵蛸LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周FRMD5 FRMD5蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml