使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）     轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

公司產(chǎn)品具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

產(chǎn)品名稱：PEG4000溶液價格

貨號：BJ-01R3278

規(guī)格：10ml

分類：細(xì)胞培養(yǎng)

儲存條件：4℃,6個月

用途：聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，可用作融合劑,以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞雜交

注意事項：無菌溶液,由DPBS(pH7.4)和PEG4000或稱聚乙二醇4000組成,經(jīng)無菌處理。體外培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞均可以做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細(xì)胞。

注意事項：

1、盡注意無菌操作，避免污染。

2、避免反復(fù)凍融。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：

1.直接配制法    對于純凈的物質(zhì)(稱做基準(zhǔn)物質(zhì))可準(zhǔn)確進(jìn)行稱量，用蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到一定容積的容量瓶中稀釋至標(biāo)線，溶液的準(zhǔn)確濃度可以直接計算出來。溶質(zhì)的純度、性質(zhì)等對濃度有較大影響，為此，對用來直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液用的基準(zhǔn)物質(zhì)必須具備以下條件：

(1)物質(zhì)的純度要高，含量不得低于99.9％，雜質(zhì)的含量應(yīng)當(dāng)少到可以忽略的程度。

(2)物質(zhì)的分子組成應(yīng)與其化學(xué)式*符合，包括結(jié)水合物中的結(jié)品水含量也必須與其化學(xué)式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質(zhì)穩(wěn)定，貯蔵時應(yīng)不發(fā)生變化，不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分，不易風(fēng)化潮解和被空氣氧化，烘干時不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準(zhǔn)物質(zhì)以減小稱量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準(zhǔn)物質(zhì)條件的物質(zhì)，可先配制成近似所需濃度的溶液，再用基準(zhǔn)物質(zhì)溶液或能與其發(fā)生定量反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，求其準(zhǔn)確濃度，這種通過滴定來確定準(zhǔn)確濃度的操作叫做“標(biāo)定"。間接法配制近似濃度溶液時不需用分析天平稱量和容量瓶配制，可用臺秤、量筒等器皿。將稱好的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到干凈的試劑瓶中，先加少量蒸餾水將其溶解，繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準(zhǔn)物的條件，故間接法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質(zhì)；濃鹽酸因易揮發(fā)而無法準(zhǔn)確稱量；不易得到分析純級的試劑等，這些物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液須用間接法來配制，經(jīng)標(biāo)定后再做標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：

1.用基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定法

(1)多次稱量法    用減重法精密稱取幾份(如2～3份)基準(zhǔn)物質(zhì)，分別倒入編號的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi)，各加少量蒸餾水溶解，再加指示劑后分別用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，各自記錄所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度，最后取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱取一份基準(zhǔn)物質(zhì)，在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解，順玻棒全部轉(zhuǎn)移到已校正好的容量瓶中，多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定體積的溶液，混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加指示劑后用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，每次做好記錄，根據(jù)所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量，分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

2.比較法標(biāo)定    如果待標(biāo)定溶液能與某標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行反應(yīng)，可吸量一定體積的某標(biāo)準(zhǔn)溶液，用待標(biāo)定溶液滴定，或吸量一定體積的待標(biāo)定溶液，用某標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，按N1V1＝N2V2式可以計算出待標(biāo)定溶液的準(zhǔn)確濃度。這種用標(biāo)準(zhǔn)落液來測定待標(biāo)定溶液準(zhǔn)確濃度的過程稱為“比較法"標(biāo)定。如果某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度由于某些原因不夠準(zhǔn)確時，就會直接影響待標(biāo)定溶液濃度的準(zhǔn)確性，顯然比較法不如用基準(zhǔn)物質(zhì)直接標(biāo)定的方法精確，但比較法簡便易行。

標(biāo)定完畢，蓋緊標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶塞，瓶簽上注明標(biāo)準(zhǔn)溶液名稱、準(zhǔn)確濃度和日期等。

Ovine Herpesvirus(OHV)綿羊皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Histone H2A.x  組蛋白H2AX抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix clematidis威靈仙LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Integrin alpha 7/ITGA7  整合素α7抗體 規(guī)格: 0.1ml

牦牛源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周EphA4 R/Eph receptor A4  酪蛋白激A4受體抗體 規(guī)格: 0.2ml

Vancomycin-Resistant Enterococcus(VRE)耐萬古腸球vanA/vanB雙重探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Mink IgG/AP  堿性磷酸（AP）標(biāo)記的兔抗水貂IgG 規(guī)格: 0.1ml

Lime witches’ broom phytoplasma來檬叢枝植原體PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周FGF9  堿性成纖維細(xì)胞生因子9抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fructus oryzae germinatus稻芽PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Cystatin A  胱抑素A/半胱蛋白抑制劑A抗體 規(guī)格: 0.2ml

Treponema denticola齒垢密螺旋體LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2  規(guī)格: 0.5ml

Corynebacterium renale牛腎盂腎炎棒桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Oxytocin R  催產(chǎn)素受體(宮素受體)抗體 規(guī)格: 0.1ml

Herba cistanches肉蓯蓉染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周His tag(2D5)  小鼠抗聚組單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

Varroa jacobsoni雅氏瓦螨LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周RIPK-1/RIP  絲蘇激1受體相互作用蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

PEG4000溶液價格Rabbit Anti-Mink IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗水貂IgG 規(guī)格: 0.1mlMIIP  IGFBP2結(jié)合蛋白/遷移和侵潤抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

BCAR1  抗雌激素耐藥蛋白1 規(guī)格: 0.2mlGYG1  糖原蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-BRCA1(Ser988)  磷酸化易基因1抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-c-Jun(Thr91+Thr93)  磷酸化原基因c-Jun抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-PAK4(Ser474)/PAK5(Ser602)/PAK6(Ser560)  磷酸化p21激活激4/5/6抗體 規(guī)格: 0.1mlPlexin A1  神經(jīng)叢蛋白A1抗體 規(guī)格: 0.2ml

IL-15RA  白介素15受體α抗體 規(guī)格: 0.2mlLCEAH/ECHS1  鏈烯脂酰輔A水化抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703)  磷酸化粘附相關(guān)激抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Beta-Catenin (Ser552)  磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

DAB2  信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能磷蛋白DAB2抗體 規(guī)格: 0.2mlcIAP1/RNF48  凋亡抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml

RNF138  環(huán)指蛋白138抗體 規(guī)格: 0.2mlDNPK1  DNA依賴蛋白激催化亞基抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-CDKN2A/P16 (Ser140)  磷酸化抑基因p16抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-APP/ABPP (Ser730)  磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

GUSB/beta glucuronidase  β葡萄糖醛酸苷抗體 規(guī)格: 0.2mlTubulin-Beta  微管蛋白抗體（免疫組化用抗體）Tubulin β 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-MLK3(Thr277/Ser281)  磷酸化絲/蘇蛋白激MLK3抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-rat IgG/FITC  FITC標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml

HBEX2/Bex1  腦組織表達(dá)X連鎖蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlPBK/TOPK  PDZ連接激/T-LAK細(xì)胞源蛋白激抗體 規(guī)格: 0.1ml