細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

人雌二醇(E2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒進口、組裝

人XIII A1(F13A1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人降鈣素(CT)免疫試劑盒進口、組裝

人丙二醛(MDA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

犬一氧化氮(NO)免疫試劑盒進口、分裝

大鼠纖溶原激活物抑制因子(PAI)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

大鼠肺炎支原體(MP)抗體免疫試劑盒進口、組裝

魚巨噬細胞遷移抑制因子(MIF)免疫試劑盒進口、組裝

葡萄球菌選擇性瓊脂110 英文名稱：Staphylococcus Selectiv

小鼠脂肪間充質干細胞Coccidioides posadasii波薩達斯球孢子探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周FBXO42  FBXO42蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Canine respiratory coronavirus, CRCoV(CRCoV)犬呼吸道病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周PPIA/Cyclophilin A  親環(huán)蛋白（親環(huán)素）PPIA抗體 規(guī)格: 0.1ml

Porcine Reovirus豬呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HDL  高密度脂蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Russian Spring-summer Encephalitis Virus俄羅斯春夏腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周NPR2L/G21 protein  G21蛋白質抗體 規(guī)格: 0.2ml

Pseudomonas gladioli唐菖蒲假單胞PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周BTNL8  嗜脂蛋白樣8抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix achyranthis bidentatae牛膝PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CARD8  凋亡加強結構域蛋白8抗體 規(guī)格: 0.1ml

Aspergillus fumigatus煙曲霉LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Bad  相關死亡促進因子Bad抗體 規(guī)格: 0.1ml

Leptospira interrogans問號鉤端螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ANKRD33B  錨蛋白重復結構域蛋白33B抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix ginseng人參PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CTn1/Troponin I/TNNC1  心肌肌鈣蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-human IgG/Bio  標記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

Streptococcus equi subspecies equi馬鏈球馬亞種LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-horse IgG  兔抗馬IgG 規(guī)格: 1mgTLK2  絲/蘇激TLK2抗體 規(guī)格: 0.2ml