樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達2.000ml。

2）. 過濾混濁溶液。

3）. 除去樣品中的CO 2 （果糖含量測試盒說明書過過濾）。

4 ）. 果糖含量測試盒說明書過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調至8.0。

5 ）. 調整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）. 用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質的樣品去蛋白。

10). 含脂肪的樣品用熱水提取。

產(chǎn)品屬性：  

商品介紹：

測定意義:

L-半乳糖途徑是合成AsA的主要途徑。Gal LDH位于線粒體內膜，負責催化植物體內AsA生物合成的最后一步，也是該途徑的關鍵酶之一，對植物體內AsA含量的積累起著至關重要的作用。

測定原理：

Gal LDH催化L-半乳糖內酯還原(Cyt c)，還原型Cyt c在550nm有吸收峰；測定還原型Cyt c增加速率，來計算Gal LDH活性。

自備儀器和用品：

臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、可調式移液器、研缽、冰和蒸餾水。

注意事項：

①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用

操作流程：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

人 FAM20B 基因全長ORF克隆

人 BCKDHB 基因全長ORF克隆

人 IDH3A 基因全長ORF克隆

人 ING5 基因全長ORF克隆

人 COQ10B 基因全長ORF克隆

人 EVI2A 基因全長ORF克隆

人 FNDC4 基因全長ORF克隆

人 RND1 基因全長ORF克隆

人 BNIP1 基因全長ORF克隆

人 RAB3C 基因全長ORF克隆

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