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貨號	BJ-X97444

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產(chǎn)品名稱	小鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	BJ-X97444

商品屬性：

名稱 小鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞

2.組織來源：胎盤組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。滋養(yǎng)層干細(xì)胞是胎盤組織細(xì)胞的祖細(xì)胞，與胚胎著床和胎盤的形成密切相關(guān)。胚胎著床和胎盤形成是母體與胎兒建立聯(lián)系的關(guān)鍵時(shí)期，此時(shí)期滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖速度快，滋養(yǎng)層干細(xì)胞自我更新和分化旺盛，與多種妊娠相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展及其增殖、功能調(diào)節(jié)的失常有密切關(guān)系。在哺乳動物胚胎發(fā)育過程中，胚胎細(xì)胞第一次分化形成內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)外胚層。滋養(yǎng)層干細(xì)胞是胎盤細(xì)胞的前體細(xì)胞，在胎盤發(fā)育中有重要作用。

5.方法簡介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞采用囊胚組織貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞經(jīng)HLA-E（白細(xì)胞抗原）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-M142

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣

傳代特性可傳2-3代左右

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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小鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞Radix platycodonis桔梗探針法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周CDK5RAP3 周期素依賴性激5激活結(jié)合蛋白C53抗體規(guī)格: 0.2mlHSP47 熱休克蛋白-47抗體規(guī)格: 0.1ml

Brucella ovis綿羊布魯氏LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Defensin β1 防御素β1抗體規(guī)格: 0.1mlDC-SIGNR/CD299 CD299抗體規(guī)格: 0.2ml

Powassan病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周C12ORF63 12號染色體開放閱讀框63抗體規(guī)格: 0.2mlPhospho-INPPL1(Tyr1135) 肌醇聚磷酸鹽磷酸樣蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml

Radix salviae miltiorrhizae丹參LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周ZNF268 鋅指脂蛋白抗體規(guī)格: 0.1mlUBE2D1 泛素蛋白連接D1抗體規(guī)格: 0.2ml

Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC) 禽致病性大腸桿（大腸埃希氏）O1血清型LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周STAU2 雙鏈RNA結(jié)合蛋白Staufen2抗體規(guī)格: 0.2mlphospho-PP2A alpha/beta(Tyr119) 磷酸化蛋酸2A（PP2Aα）抗體規(guī)格: 0.1ml

Sammarez Reef病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Rabbit Anti-human IgG 兔抗人IgG 規(guī)格: 1mgCYP1A1 細(xì)胞色素P450 1A1抗體規(guī)格: 0.1ml

Poria茯苓LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周C6orf150 6號染色體開放閱讀框150抗體規(guī)格: 0.2mlCOMP/EPD1/THBS5 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Rhizoma alpiniae officinarum高良姜PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周PI 3 Kinase p85 beta 磷脂酰肌醇激p85β抗體規(guī)格: 0.1mlGSTA3 S轉(zhuǎn)移A3抗體規(guī)格: 0.1ml

Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1M-F)人免疫缺陷病毒1型M群F型RT-LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周phospho-CPI17 alpha (Thr38) 磷酸化蛋酸激PKC/CPI-17抗體規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Biotin 兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml

legionella pneumophila嗜肺軍團(tuán)探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Dysferlin Dysferlin蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。