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貨號	BJ-X97064

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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產(chǎn)品名稱	兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	BJ-X97064

商品屬性：

名稱 兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞

2.組織來源：股骨、脛骨

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞分離自股骨、脛骨；骨內(nèi)膜是一層致密結(jié)締組織膜，覆蓋在骨的表面（關(guān)節(jié)面除外），新鮮骨內(nèi)膜呈粉紅色，含有豐富的血管、神經(jīng)和成骨細胞。此外，附著于骨的肌腱、韌帶于附著部位都與骨內(nèi)膜編織在一起。因而骨內(nèi)膜與骨質(zhì)結(jié)合甚為牢固。骨內(nèi)膜富含血管、神經(jīng)，通過骨質(zhì)的滋養(yǎng)孔分布于骨質(zhì)和骨髓。骨內(nèi)膜分內(nèi)、外兩層，外層主要是粗大的膠原纖維束，部分纖維穿入骨質(zhì)，使骨內(nèi)膜固定于骨面；內(nèi)層疏松，含成骨細胞和破骨細胞（分別具有產(chǎn)生新骨質(zhì)和改建骨的功能）。骨髓腔和骨松質(zhì)的網(wǎng)眼也襯著一層菲薄的結(jié)締組織膜，叫做骨膜。骨內(nèi)膜的內(nèi)層和骨膜有分化成骨細胞和破骨細胞的能力，以形成新骨質(zhì)和破壞、改造已生成的骨質(zhì)，所以對骨的發(fā)生、生長、修復(fù)等具有重要意義。骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞是一種具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞的體外培養(yǎng)條件要求較高，在培養(yǎng)過程中，受貼壁時間、種植密度、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。

5.方法簡介：

()實驗室分離的兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞采用沖洗骨髓、消化骨內(nèi)膜、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實驗室分離的兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-Rb014

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)成纖維細胞樣

傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

圖片13.jpg

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

小鼠 DLL4 ELISA配對抗體

人 LILRB3 ELISA配對抗體

人 LCN1 / Lipocalin 1 ELISA配對抗體

人 IL17RD ELISA配對抗體

人 CD84 ELISA配對抗體

人 CD7 ELISA配對抗體

人 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D ELISA配對抗體

人 KLK13 / Kallikrein 13 ELISA配對抗體

人 PIGR ELISA配對抗體

人 PDGFRA / CD140a ELISA配對抗體

兔骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞Equine Influenza Virus(EIV)馬流感病毒H3N8亞型RT-LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周PRKD1/PKC mu 蛋白激C mu型抗體規(guī)格: 0.2mlphospho-PAK1+PAK2+PAK3 (Ser141) 磷酸化p21激活激1/2/3抗體規(guī)格: 0.1ml

Corynebacterium bovis牛棒桿探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周NS5ATP9/KIAA0101 丙型毒非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9抗體規(guī)格: 0.2mlIFNAR2/IFNABR 干擾素α受體2抗體規(guī)格: 0.2ml

Nodus nelumbinis rhizomatis藕節(jié)染料法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周CD4 CD4抗體 0.1mlFOXO1 叉蛋白O1抗體規(guī)格: 0.1ml

Porcine Endogenous Retrovirus(PERV) Provirus 豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周CLEC2D/OCIL CLEC2D蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Salmonella spp.沙門氏通用探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周HSPB7/cvHSP 熱休克蛋白β7抗體規(guī)格: 0.2ml

Radix angelicae dahuricae白芷LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周SLC16A7/MCT2 單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白2抗體規(guī)格: 0.1ml

Avian Herpesvirus 1(Gallid Herpesvirus-1、GaHV-1)禽皰疹病毒1型LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Phospho-Mst1(Thr183) 磷酸化蛋白激MST1抗體規(guī)格: 0.1ml

Listeria spp.李斯特通用探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周PLEKHM1 石骨癥相關(guān)蛋白PLEKHM1抗體規(guī)格: 0.2ml

Human Parainfluenza Virus 4B(HPIV-4B)人副流感病毒4B型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Annexin A1 膜粘連蛋白A1抗體規(guī)格: 0.1ml

Actinomyces europaeus歐洲放線染料法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周mTOR/FRAP 雷帕霉素靶蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml