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葡萄糖脫氫酶測試盒50管/48樣

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產(chǎn)品型號

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-14 15:48:07瀏覽次數(shù):119次

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貨號 BJ-01S9955
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產(chǎn)品名稱

檢測方法

規(guī)格

貨號

葡萄糖脫氫酶測試盒50管/48樣

紫外分光光度法

50管/48樣

BJ-01S9955

商品介紹:

測定意義:

GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,大量存在于高等動物的肝臟和弱氧化醋桿菌中。在低聚果糖生產(chǎn)中使用GCDH,不僅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量,而且生成的葡萄糖酸與鈣離子結(jié)合生成的是一種理

想的補(bǔ)鈣制劑。因而,GCDH已成為制備高含量低聚果糖的理想用酶。

測定原理:

GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,在340nm下測定NADH上升速率,即可反映GCDH活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

QQ截圖20220307153443.png 

注意事項(xiàng):

①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用

樣品制備:

1). 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,體積可達(dá)2.000ml。

2). 過濾混濁溶液。

3). 除去樣品中的CO 2 (果糖含量測試盒說明書過過濾)。

4 ). 果糖含量測試盒說明書過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。

6 ). 用空白樣品做對照測定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。

7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。

9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。

10).含脂肪的樣品用熱水提取。

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操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

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