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貨號	BJ-X97580

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產(chǎn)品名稱	腎小管上皮細胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	BJ-X97580

商品屬性：

名稱 腎小管上皮細胞

2.組織來源：腎組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

人腎小管上皮細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。腎小管是機體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細長上皮性小管，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用。腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和遠端小管三部分；近端小管可分為直部和曲部，曲部也稱為近曲小管，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)，于腎小體附近高度蟠曲；遠端小管曲部也稱為遠曲小管，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)。腎小管上皮細胞是腎小管外面的一層細胞，腎小管上皮細胞的分離、培養(yǎng)是研究腎臟疾病的一項重要技術(shù)，目前該細胞分離方法有酶分離法、化學(xué)分離法篩網(wǎng)分離法、顯微解剖分離法、流式細胞儀分離法等。腎小管上皮細胞主要功能：①腎小管上皮細胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸；②排泌非營養(yǎng)物質(zhì)進入終尿；③細胞能分泌炎癥介質(zhì)如細胞因子和趨化因子，通過產(chǎn)生IL-8或直接趨化白細胞參與急性炎癥反應(yīng)；④移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC表達IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原，這說明腎小管上皮細胞參與腎免疫損傷的發(fā)生。隨著對腎間質(zhì)纖維化機制研究的日漸加深，腎小管上皮細胞（RTECs）在其中的作用日益被人們重視。因此，提供良好的腎小管上皮細胞模型，在腎小管間質(zhì)疾病的發(fā)病機制和治療藥物篩選的研究中是非常重要的。

5.方法簡介：

()實驗室分離的人腎小管上皮細胞 采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實驗室分離的人腎小管上皮細胞 經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-H193

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)上皮細胞樣

傳代特性可傳1-2代左右

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

猴slit同源物2(果蠅)(SLIT2)免疫試劑盒進口、分裝

兔熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)免疫試劑盒進口、組裝

人黑色素細胞抗體(MC Ab)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

犬肌酸激同工MB(CK-MB)免疫試劑盒進口、分裝

雞抗人IgM antibody 免疫試劑盒進口、組裝

大鼠結(jié)合蛋白4(RBP-4)免疫試劑盒進口、組裝

大鼠補體片斷5(C5)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

氯化鈉蔗糖ows\system32\EhStorShell.dll

腎小管上皮細胞Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)腸出血性大腸桿O157:H7血清型探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Cytosine deaminase 胞嘧啶脫氨抗體 0.2mlSIGLEC14 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素14抗體規(guī)格: 0.2ml

Sepik Virus塞皮克病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Calretinin/CA 鈣結(jié)合蛋白抗體規(guī)格: 0.1mlMURF3 肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml

Washington University Polyomavirus（WUPyV）WU多瘤病毒染料法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周RIP3 受體結(jié)合絲蘇激3抗體規(guī)格: 0.2mlADAM20 去整合素樣金屬蛋白20抗體規(guī)格: 0.2ml

Borrelia anserina鵝疏螺旋體（鵝包柔螺旋體）LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周G protein alpha S G蛋白αS抗體（核苷酸結(jié)合蛋白Gα s）規(guī)格: 0.2mlphospho-Bid(Ser61) 磷酸化BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Xanthomonas hyacinthi風(fēng)信子黃腐病PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周KLK11 激肽釋放11抗體規(guī)格: 0.1mlIRF3 干擾素調(diào)節(jié)因子3 規(guī)格: 0.1ml

Radix astragali preparata炙黃芪PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周NADE/NGFRAP1 神經(jīng)生因子受體相關(guān)蛋白1抗體規(guī)格: 0.2mlMMS21/NSE2 E3連接MMS21蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Staphylococcus pseudintermedius偽中間型葡萄球LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Kv4.3/KCND3 離子通道蛋白Kv4.3抗體規(guī)格: 0.1mlMICS1 生激素誘導(dǎo)跨膜蛋白抗體（真皮源性蛋白2）規(guī)格: 0.2ml

Avian Metapneumovirus(aMPV)禽偏肺病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周FADD Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白規(guī)格: 0.1mlCobra poison Protein 眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Pericarpium trichosanthis瓜蔞皮探針法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周NAP1L2 腦特異性蛋白BPX抗體規(guī)格: 0.2mlHepatitis E Virus ORF3 毒抗體規(guī)格: 0.1ml

Brucella bovis牛布魯氏桿LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Thymosin Alpha-1/PTMA 胸肽α1抗體規(guī)格: 0.1mlCripto 1 monoclonal (CT) 畸胎瘤衍化生因子單克隆抗體(C端) 規(guī)格: 0.1ml

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。