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貨號	BJ-X97192

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產(chǎn)品名稱	兔胰腺星狀細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	BJ-X97192

商品屬性：

名稱 兔胰腺星狀細(xì)胞

2.組織來源：胰腺組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

兔胰腺星狀細(xì)胞分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶、等。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細(xì)胞分泌胰島素，降低血糖；γ細(xì)胞分泌，以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌；PP細(xì)胞分泌胰多肽，抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星狀細(xì)胞（PSC）是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細(xì)胞，PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴，并表達(dá)Desmin蛋白，活化后的PSC則表達(dá)α-平滑肌肌動蛋白（alpha-SMA）。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種，并分別具有特異的標(biāo)志物。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的A脂滴可以被油紅O染成紅色，陽性表達(dá)Desmin。激活狀態(tài)PSC陽性表達(dá)alpha-SMA。油紅O染色發(fā)現(xiàn)，原代分離的細(xì)胞培養(yǎng)6d，胞漿中仍可見明顯的脂滴，傳代后，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，細(xì)胞接種24h仍然表達(dá)Desmin，48h后Desmin基本不再表達(dá)。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細(xì)胞開始表達(dá)alpha-SMA，隨著培養(yǎng)時間的增長和傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞表達(dá)alpha-SMA，而不再表達(dá)Desmin，說明細(xì)胞活化。提示PSC接種24h后即啟動了激活過程，至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細(xì)胞激活，傳代后細(xì)胞處于高度激活狀態(tài)。原代胰腺星狀細(xì)胞可作為慢性胰腺炎新藥的細(xì)胞篩選模型，目前研究發(fā)現(xiàn)：胰腺受損時，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細(xì)胞活化，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)、功能發(fā)生變化，促使基質(zhì)增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積。

5.方法簡介：

()實驗室分離的兔胰腺星狀細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實驗室分離的兔胰腺星狀細(xì)胞經(jīng)α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-Rb048

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣

傳代特性可傳3-5代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠胰高血糖素樣肽2(Glp-2)免疫試劑盒*直銷

大鼠抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)抗體免疫試劑盒*直銷

大鼠α葡萄糖苷(a-Glu)免疫試劑盒*直銷

蜥蜴雌二醇(E2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

Pfizer腸球菌選擇性瓊脂（PSE瓊脂）英文名稱：Pfizer Enterococcus Selective Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

采樣吸取液1-GVPC液體培養(yǎng)基添加劑英文名稱：產(chǎn)品規(guī)格：1ml*3支/管

B5培養(yǎng)基英文名ows\system32\EhStorShell.dll

兔胰腺星狀細(xì)胞Yersinia pestis鼠疫耶爾森(鼠疫桿)探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 1-2周CCDC146 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白146抗體規(guī)格: 0.2mlEMR1 表皮生因子樣激素受體1 規(guī)格: 0.2ml

Fructus viticis蔓荊子探針法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周phospho-IRS1(Ser789) 磷酸化胰島素受體底物-1抗體規(guī)格: 0.1mlMorphine 啡抗體規(guī)格: 0.2ml

Trypanosoma vivax活動錐蟲LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周MMP19 基質(zhì)金屬蛋白18/19 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Streptomyces spp.鏈霉通用探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周NUCKS1 核酪蛋白激和細(xì)胞周期蛋白依賴性激底物1抗體規(guī)格: 0.2mlTSSK6/CT72 睪特異絲/蘇激6抗體規(guī)格: 0.2ml

Influenza Virus A甲型流感（）病毒H5N8亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用） 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周ORP4/OSBP2 氧化固醇結(jié)合蛋白4抗體規(guī)格: 0.2mlCD66a/CEACAM1 胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子1抗體規(guī)格: 0.2ml

蛇源性成分LAMP試劑盒種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周G-CSFR/CD114 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子3受體抗體規(guī)格: 0.1mlJUP/Cateninma γ γ連環(huán)蛋白抗體（Catenin γ ， γ鏈接素）規(guī)格: 0.2ml

Sporothrix schenckii申克孢子細(xì)探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周MAPK11/p38Beta 絲裂原活化的蛋白激p38β抗體規(guī)格: 0.1mlCeruloplasmin 銅藍(lán)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Potato witches’ broom phytoplasma馬鈴薯叢枝植原體PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Goat Anti-rat IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.5mlphospho-PI3KCA(Tyr317) 磷酸化磷脂酰肌醇激催化亞單位A抗體規(guī)格: 0.1ml

Rhizoma phragmitis蘆根PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周LH beta 促黃體生成素抗體規(guī)格: 0.1mlIL-6 白介素6抗體規(guī)格: 0.1ml

Cooperia punctata匙形古柏線蟲LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Bcl-6/5 原基因Bcl-6抗體規(guī)格: 0.2mlFCAR/CD89 免疫球蛋白A Fc段受體1抗體規(guī)格: 0.1ml

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。