使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選

1）     轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

公司產(chǎn)品具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產(chǎn)品名稱：精子細胞BWW培養(yǎng)基儲存液說明書

貨號：BJ-01R3318

規(guī)格：500ml

分類：培養(yǎng)基

儲存條件：4℃,12個月

用途：精子細胞BWW培養(yǎng)基

注意事項：無菌溶液。經(jīng)過濾除菌處理。配置BWW培養(yǎng)基的方法，每100ml儲存液添加210mg，100mg葡萄糖，0.37ml乳酸鈉，丙酮酸鈉， BSA，10000U ，10mg等成分。

注意事項：

1、盡注意無菌操作，避免污染。

2、避免反復(fù)凍融。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：

1.直接配制法    對于純凈的物質(zhì)(稱做基準(zhǔn)物質(zhì))可準(zhǔn)確進行稱量，用蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到一定容積的容量瓶中稀釋至標(biāo)線，溶液的準(zhǔn)確濃度可以直接計算出來。溶質(zhì)的純度、性質(zhì)等對濃度有較大影響，為此，對用來直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液用的基準(zhǔn)物質(zhì)必須具備以下條件：

(1)物質(zhì)的純度要高，含量不得低于99.9％，雜質(zhì)的含量應(yīng)當(dāng)少到可以忽略的程度。

(2)物質(zhì)的分子組成應(yīng)與其化學(xué)式*符合，包括結(jié)水合物中的結(jié)品水含量也必須與其化學(xué)式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質(zhì)穩(wěn)定，貯蔵時應(yīng)不發(fā)生變化，不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分，不易風(fēng)化潮解和被空氣氧化，烘干時不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準(zhǔn)物質(zhì)以減小稱量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準(zhǔn)物質(zhì)條件的物質(zhì)，可先配制成近似所需濃度的溶液，再用基準(zhǔn)物質(zhì)溶液或能與其發(fā)生定量反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進行滴定，求其準(zhǔn)確濃度，這種通過滴定來確定準(zhǔn)確濃度的操作叫做“標(biāo)定"。間接法配制近似濃度溶液時不需用分析天平稱量和容量瓶配制，可用臺秤、量筒等器皿。將稱好的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到干凈的試劑瓶中，先加少量蒸餾水將其溶解，繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準(zhǔn)物的條件，故間接法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質(zhì)；濃鹽酸因易揮發(fā)而無法準(zhǔn)確稱量；不易得到分析純級的試劑等，這些物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液須用間接法來配制，經(jīng)標(biāo)定后再做標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：

1.用基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定法

(1)多次稱量法    用減重法精密稱取幾份(如2～3份)基準(zhǔn)物質(zhì)，分別倒入編號的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi)，各加少量蒸餾水溶解，再加指示劑后分別用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點，各自記錄所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度，最后取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱取一份基準(zhǔn)物質(zhì)，在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解，順玻棒全部轉(zhuǎn)移到已校正好的容量瓶中，多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定體積的溶液，混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加指示劑后用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點，每次做好記錄，根據(jù)所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量，分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

2.比較法標(biāo)定    如果待標(biāo)定溶液能與某標(biāo)準(zhǔn)溶液進行反應(yīng)，可吸量一定體積的某標(biāo)準(zhǔn)溶液，用待標(biāo)定溶液滴定，或吸量一定體積的待標(biāo)定溶液，用某標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，按N1V1＝N2V2式可以計算出待標(biāo)定溶液的準(zhǔn)確濃度。這種用標(biāo)準(zhǔn)落液來測定待標(biāo)定溶液準(zhǔn)確濃度的過程稱為“比較法"標(biāo)定。如果某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度由于某些原因不夠準(zhǔn)確時，就會直接影響待標(biāo)定溶液濃度的準(zhǔn)確性，顯然比較法不如用基準(zhǔn)物質(zhì)直接標(biāo)定的方法精確，但比較法簡便易行。

標(biāo)定完畢，蓋緊標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶塞，瓶簽上注明標(biāo)準(zhǔn)溶液名稱、準(zhǔn)確濃度和日期等。

鴨源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CA8  碳酸酐相關(guān)蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2ml

Canine Adenovirus (CAV)犬腺病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周GAPDH  3-磷酸甘油醛脫（兔來源免疫組化用抗體） 規(guī)格: 0.1ml

Phoma glomerata葡萄莖枯病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HAGHL  羥基酰水解樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rhizoma coptidis黃連PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周MAL  MAL蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Plasmodium ovale卵形瘧原蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-P53(Thr55)  磷酸化瘤抑制基因P53抗體 規(guī)格: 0.1ml

Bluetongue Virus(BTV)藍舌病病毒通用探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周GCOM1  GCOM1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fructus citri香櫞染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周phospho-RKIP (Ser 153)  磷酸化Raf激抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Swine Enteric Alphacoronavirus(SeACoV)豬腸道甲型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-IKK beta(Tyr199)  磷酸化KB抑制蛋白激β抗體 規(guī)格: 0.1ml

Duck Hepatitis Virus 1(DHV-1)鴨肝炎病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周LGALS3BP  可溶性半糖凝集素3結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fructus setariae germinatus谷芽LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Rabbit Anti-Bov IgG/APC  APC標(biāo)記的兔抗牛IgG  規(guī)格: 0.1ml

精子細胞BWW培養(yǎng)基儲存液說明書CDC42  細胞分化周期CDC42蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

CACNA1S  電壓依賴性鈣通道Cav1.1抗體 規(guī)格: 0.2ml

MYCBP2  MYC結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

PCDHA7  原鈣粘附蛋白α7抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-VAV1(Tyr174)   磷酸化鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Galc  半糖腦苷脂抗體 0.1ml

WFDC5  P53應(yīng)答基因蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml

Camk1g  鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激IG抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-MEF2C(Thr20)  磷酸化肌細胞增強因子2C抗體 規(guī)格: 0.1ml

FGF11  成纖維細胞生因子11抗體 規(guī)格: 0.2ml