使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）     轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

公司產(chǎn)品具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

產(chǎn)品名稱：YT培養(yǎng)基價(jià)格

貨號(hào)：BJ-01R3312

規(guī)格：500ml

分類：培養(yǎng)基

儲(chǔ)存條件：4℃,6個(gè)月

用途：繁殖M13噬菌體

注意事項(xiàng)：無菌溶液。主要由酵母提取物、蛋白胨、氯化鈉等組成,其中酵母提取物、蛋白胨濃度均高于平普通LB培養(yǎng)基。經(jīng)高壓滅菌處理。

注意事項(xiàng)：

1、盡注意無菌操作，避免污染。

2、避免反復(fù)凍融。

3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：

1.直接配制法    對(duì)于純凈的物質(zhì)(稱做基準(zhǔn)物質(zhì))可準(zhǔn)確進(jìn)行稱量，用蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到一定容積的容量瓶中稀釋至標(biāo)線，溶液的準(zhǔn)確濃度可以直接計(jì)算出來。溶質(zhì)的純度、性質(zhì)等對(duì)濃度有較大影響，為此，對(duì)用來直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液用的基準(zhǔn)物質(zhì)必須具備以下條件：

(1)物質(zhì)的純度要高，含量不得低于99.9％，雜質(zhì)的含量應(yīng)當(dāng)少到可以忽略的程度。

(2)物質(zhì)的分子組成應(yīng)與其化學(xué)式*符合，包括結(jié)水合物中的結(jié)品水含量也必須與其化學(xué)式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質(zhì)穩(wěn)定，貯蔵時(shí)應(yīng)不發(fā)生變化，不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分，不易風(fēng)化潮解和被空氣氧化，烘干時(shí)不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準(zhǔn)物質(zhì)以減小稱量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準(zhǔn)物質(zhì)條件的物質(zhì)，可先配制成近似所需濃度的溶液，再用基準(zhǔn)物質(zhì)溶液或能與其發(fā)生定量反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，求其準(zhǔn)確濃度，這種通過滴定來確定準(zhǔn)確濃度的操作叫做“標(biāo)定"。間接法配制近似濃度溶液時(shí)不需用分析天平稱量和容量瓶配制，可用臺(tái)秤、量筒等器皿。將稱好的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到干凈的試劑瓶中，先加少量蒸餾水將其溶解，繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準(zhǔn)物的條件，故間接法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質(zhì)；濃鹽酸因易揮發(fā)而無法準(zhǔn)確稱量；不易得到分析純級(jí)的試劑等，這些物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液須用間接法來配制，經(jīng)標(biāo)定后再做標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：

1.用基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定法

(1)多次稱量法    用減重法精密稱取幾份(如2～3份)基準(zhǔn)物質(zhì)，分別倒入編號(hào)的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi)，各加少量蒸餾水溶解，再加指示劑后分別用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，各自記錄所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度，最后取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱取一份基準(zhǔn)物質(zhì)，在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解，順玻棒全部轉(zhuǎn)移到已校正好的容量瓶中，多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定體積的溶液，混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加指示劑后用待標(biāo)定溶液滴定至等當(dāng)點(diǎn)，每次做好記錄，根據(jù)所消耗待標(biāo)定溶液的體積，結(jié)合基準(zhǔn)物質(zhì)的重量，分別算出溶液的準(zhǔn)確濃度取平均值做為標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。

2.比較法標(biāo)定    如果待標(biāo)定溶液能與某標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行反應(yīng)，可吸量一定體積的某標(biāo)準(zhǔn)溶液，用待標(biāo)定溶液滴定，或吸量一定體積的待標(biāo)定溶液，用某標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，按N1V1＝N2V2式可以計(jì)算出待標(biāo)定溶液的準(zhǔn)確濃度。這種用標(biāo)準(zhǔn)落液來測(cè)定待標(biāo)定溶液準(zhǔn)確濃度的過程稱為“比較法"標(biāo)定。如果某標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度由于某些原因不夠準(zhǔn)確時(shí)，就會(huì)直接影響待標(biāo)定溶液濃度的準(zhǔn)確性，顯然比較法不如用基準(zhǔn)物質(zhì)直接標(biāo)定的方法精確，但比較法簡(jiǎn)便易行。

標(biāo)定完畢，蓋緊標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶塞，瓶簽上注明標(biāo)準(zhǔn)溶液名稱、準(zhǔn)確濃度和日期等。

Ovine Astrovirus 2(OAstV)綿羊星狀病毒2型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周FAM156A/TMEM2  跨膜蛋白29抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgG  兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 1mg

Flos mume梅花染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周PRSS10/TMPRSS2  絲蛋白10抗體 規(guī)格: 0.2mlPHKA1  磷酸激α1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Avian Myelocytoma Virus(AMV)鳥類髓  瘤病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Cytoglobin  細(xì)胞球蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlRALA+RALB  Ras樣蛋白A+B抗體 規(guī)格: 0.2ml

Babesia divergens分歧巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周GRK2/BARK1/ADRBK1  G蛋白偶合受體激2抗體 規(guī)格: 0.1mlE3 ubiquitin ligase/RNF218  E3泛素連接抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rhizoma typhonii白附子LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周CLDND1  膜蛋白CLDND1抗體 規(guī)格: 0.1mlCYP11B2  醛固酮合成CYP11B2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mycoplasma iowae衣阿華支原體LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Cytokeratin 5/CK5  細(xì)胞角蛋白5抗體 0.1mlFLAP/5-lipoxygenase activating protein  5脂氧合激活蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Herpesvirus of Turkey (HVT) 火雞皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Integrin alpha 2/CD49b  整合素α2抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-INPPL1(Ser576)  肌醇聚磷酸鹽磷酸樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Human T-cell Lymphoma Virus 1(HTLV-1)人類嗜T淋巴  病毒1型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-human IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1mlGNMT  甘-N-甲基轉(zhuǎn)移 規(guī)格: 0.2ml

河豚魚源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周SPHK2  鞘氨醇激2抗體 規(guī)格: 0.2mlRASD2/Tumor endothelial marker 2  瘤管內(nèi)皮標(biāo)記蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Penicillium islandicum島青霉LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周phospho-TNIK(Ser769)   磷酸化TRAF2和NCK激相互作用蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlCellulase  纖維素 1ml

YT培養(yǎng)基價(jià)格CXCL15/Lungkine  趨化因子CXCL15抗體 規(guī)格: 0.2mlNAIF1 protein  核凋亡誘導(dǎo)因子蛋白1 規(guī)格: 0.2ml

NALP2/PAN1/PYPAF2  富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlPDGF Receptor beta/PDGFRB  小板源性生因子受體B抗體(PDGFRβ) 規(guī)格: 0.1ml

GST tag/GSTM1  GST標(biāo)簽蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlATF4/CREB-2  活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體 規(guī)格: 0.1ml

Collagen IV  抗IV型膠原抗體 規(guī)格: 0.1mlChemerin/TIG2  酸受體應(yīng)答蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml

ETFB  電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽/黃素蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlHMGCS2  三羥基三甲基輔A合成2抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD146/MCAM  黑色素瘤細(xì)胞粘附分子CD146抗體 規(guī)格: 0.1mlCytochrome P450 2D1  YP2D1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-Avidin/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格: 0.1mlMAdCAM1  粘膜細(xì)胞粘附分子1抗體 規(guī)格: 0.2ml

PCK2  磷酸羧化2抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-MAP3K8/Tpl2 (Thr290)  磷酸化絲裂原活化蛋白激激8抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-PRKD3(Ser41)  磷酸化蛋白激C nu型抗體 規(guī)格: 0.1mlEphA8/Eph receptor A8  酪蛋白激受體A8抗體 規(guī)格: 0.2ml

VDAC3  線粒體外膜孔蛋白3抗體（電壓依賴陰離子通道蛋白3） 規(guī)格: 0.2mlDISC1 (CT)  DISC1 C端抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Bcl-2(Thr129)  磷酸化Bcl-2抗體 規(guī)格: 0.1ml

CRELD2  富含半胱與表皮生因子樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml